Tarea

1. Explique por qué el rompimiento de la pared celular es uno de los pasos más crítico en la extracción del ADN de Mycobacterium tuberculosis.
Para la liberación del ADN, por medio de presión de los bacilos seguido por la adición de enzimas (lisozima y proteinasa K) y el uso de un detergente, sodio dodecil sulfato (SDS).
2. Establezca diferencias a groso modo entre la estructura de unacélula bacteriana y una célula vegetal. Sobretodo relacione en ambos tipos de células dónde se encuentra el ADN.
No tienen pared celular, no tienen cloroplastos y tienen centrosoma (C. Animal)
Núcleo generalmente más centrado (C. Animall)
Núcleo generalmente desplazado (C. Vegetal)
Con lisosomas (C. Animall)
Sin lisosomas (C. Animall)
Lo que diferencia a las células animales de las vegetales esel tipo de nutrición. Según cuál sea la fuente de energía y el donador de electrones para su metabolismo
3. Explique por que la precipitación del ADN con etanol frío constituye un paso crítico para disminuir significativamente la cantidad de RNA (PISTA: interacciones se presentan con el DNA-Etanol frío vs RNA-Etanol frío, constante dieléctrica).
La precipitación del etanol es crucial para elaislamiento de ADN que está contaminado con una cantidad mínima de ARN. La cantidad de ARN disminuye significativamente con el aumento del tiempo de la precipitación a -20 ° C. Precipitación del ADN por 20 a 1 h de corriente generalmente elimina la mayor parte del ARN. Por otra parte, la omisión de este paso da una gran cantidad de ARN.
La cantidad de ARN disminuye con el aumento del tiempo dela precipitación a -20 ° C.
4. De los protocolos de extracción que se encuentran en los artículos, cuál(es) paso(s) repetiría con el fin de aumentar la eficiencia del protocolo de extracción (seleccione máximo 2).
Varios lavados con etanol
5. Explique porque el método espectrofotométrico permite cuantificar la cantidad y pureza del ADN, ¿Que importancia tienen los grupos fosfatos y elazúcar ribosa en esta cuantificación?
La cantidad y pureza de los ácidos nucleicos en una preparación puede estimarse mediante espectrofotometría. La absorción a 260 nm permite calcular su concentración: 1 unidad de absorbancia (UA) corresponde aproximadamente a 50 μg/mL para DNA de cadena doble y 40 μg/mL para DNA de cadena simple y RNA. El cociente A260/A280 da una estimación de la pureza de losácidos nucleicos: una preparación pura de DNA y RNA tiene un valor de A260/A280 de 1,8 y 2,0 respectivamente. Valores significativamente menores indican contaminación con proteínas o fenol, y, por consiguiente, no será posible cuantificar con precisión la cantidad de ácidos nucleicos.

6. Debido a qué factores, puede dificultarse aun más la extracción del ADN vegetal
Altas cantidades depolisacáridos, polifenoles y diversos metabolitos secundarios como alcaloides, flavonoides y taninos en especies de árboles suelen interferir con el aislamiento del ADN .

7. La calidad espectral del ADN es determinada por la relación A260/A280. Indique en que rango esta relación indica un alto nivel de pureza.
En el rango 1.8-2.0 indica una alto nivel de pureza
8. Para cada protocolo deextracción qué factor(es) considera crítico(s) para una buena extracción?
Vegetal
Lisis de la pared celular, con el CTAB solubiliza las membranas celulares
Desnaturalización y separación de las proteínas del ADN por el buffer TE
Eliminación de fenoles por PVPP q interfieren con la extracción de ADN
Desnaturalización de proteínas, remover residuos de lípidos y fenoles en la muestra conCloroformo/Alcohol Isoamílico
Varios lavados con etanol para la precipitación y aislamiento del ADN
Bacteriano
Desnaturalización y separación de las proteínas del ADN por el buffer TE
Hidrocloruro de Guanidinio para la desnaturalización de proteínas
Varios lavados con etanol para la precipitación y aislamiento del ADN
9. Por qué los polisacáridos y otras moléculas contaminantes suelen...