tareas

Digestión de DNA usando
Enzimas de Restricción
Biol 3051L

Objetivos
El cortar el DNA con enzimas de restricción es muchas
veces el primer paso de los investigadores para estudiar
un gen. Eneste laboratorio se hará lo siguiente:
 Exponer al estudiante a tecnología actual.
 Usar enzimas de restricción para cortar el DNA.
 Separar los fragmentos usando electroforésis.
 Analizaránun gel con DNA cortado con diferentes
enzimas de restricción.

Restricción de DNA


En bacterias, un plásmido, una pieza circular de DNA,
constituye una gran parte del material genético.

El plásmido tiene que hacerse linear para poder
recombinarse. Las enzimas de restricción reconocen
secuencias específicas en el DNA.

Lambda DNA:





Un vector ampliamente usadopara crear
DNA recombinante.
48,502 pares de bases de longitud.
Usualmente un DNA recombinante de
lambda tiene 80% DNA del vector y 20% del
DNA insertado.

Enzimas de restricción





También conocidas como endonucleasas, cortan los enlaces
fosfodiester a partir de ua secuencia que reconocen.
La secuencia que reconocen es una secuencia palindrómica
(secuencia que se leeigual en ambas direcciones).
Son extraídas de bacterias, donde actuan como mecanismo de
defensa para degradar material genético extraño que entre en la
célula.
Las enzimas a usar en estelaboratorio - BamHI, HindIII y EcoRI,
toman el nombre de las bacterias que la producen:


EcoRI: E = género Escherichia.
co = especie coli
R = cepa RV 13
I = primera endonucleasa aislada de esta cepaLas enzimas de restricción al cortar DNA
pueden producir dos tipos de cortes:



Cohesivos o pegajosos: cortan a manera
escalonada en dos puntos diferentes.



Abruptos: cortan en unsólo punto.

Corte cohesivo con EcoRI:

Electroforesis de DNA:


Después de tratar el lambda DNA con las diferentes
enzimas, los fragmentos son separados por su
tamaño usando un gel de...