Tecnicas moleculares

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA
CÁTEDRA BIOTECNOLOGÍA PARA NO BIOTECNÓLOGOS
TALLER TÉCNICAS MOLECULARES

Nombre: Mateo Romero Arcila

Las técnicas moleculares revolucionaron el mundo de la investigación científica, pues aportaron las herramientas necesarias para estudiar las moléculas de ADN, logrando la manipulación biotecnológica de losácidos nucleicos

Electroforesis:
¿Cuál es el principio de la electroforesis?

La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.

Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo eléctrico, estasexperimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el ánodo (el polo positivo).

¿Cuáles son las aplicaciones que se le han dado a esta técnica?

La electroforesis en papel se usa para la separaciónde sustancias de bajo peso molecular como aminoácidos y péptidos, muy útil el los laboratorios clínicos por su fácil manipulación y su rápido desarrollo.

La electroforesis en gel puede ser una técnica preparativa para purificar moléculas antes de aplicar espectrometría de masas, clonación o secuenciación de ADN, se puede aplicar en ácidos nucleicos, y en proteínas.

Otros usos :

deteccióncontrol de pureza

caracterización

cuantificación

preparación

purificación

¿Qué clases de electroforesis se pueden encontrar?

1.1 Electroforesis de frente móvil o libre

1.2. Electroforesis de zona:

• Electroforesis en papel

• Electroforesis en gel

Existe una gran variedad de tipos de electroforesis en gel, que se pueden agrupar en dos categorías:

a)Electroforesis en gel en una dimensión (continuo o discontinuo)

○ Electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE)

○ PAGE en condiciones desnaturalizante

○ PAGE en condiciones no desnaturalizantes

○ SDS – PAGE

○ Isoelectroenfoque

○ Electroforesis en campos pulsantes

b) Electroforesis en gel en dos dimensiones (bidimensional)

1.3 Electroforesis capilar

1.3.1 Electroforesis capilarde zona (CZE)

1.3.2 Electroforesis capilar en gel (CGE)

1.3.3 Isotacoforesis capilar (CITP)

1.3.4 Isoelectroenfoque capilar (CIEF)

1.3.5 Cromatografía electrocinética capilar micelar (MEKC)

Nota: la electroforesis mas común utilizada en los laboratorios es SDS-PAGE

¿Por qué es importante el aporte de la electroforesis al desarrollo de la biotecnología?

Porque esta técnica esuna gran herramienta para el desarrollo de la biotecnología ya que permite separar moléculas y permite analizar proteínas y ácidos nucleidos

ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN

¿Cuál es el origen de las enzimas de restricción? Son extraídas de organismos procarióticos (bacterias), donde actúan como un mecanismo de defensa, para degradar material genético extraño que entre en la célula. Lasbacterias tienen la capacidad de metilar su DNA, lo cual sirve para distinguir entre el DNA extraño y el DNA propio. Las enzimas de restricción no pueden cortar DNA metilado, de este modo solo afectan el DNA extranjero y no el DNA bacterial.
Fueron descubiertas en la década del ’70 por los microbiólogos Werner Arber, Daniel Nathans y Hamilton Smith y hasta la fecha existen más de 250 enzimas derestricción.

¿Cómo se denominan las enzimas de restricción?

Su nombre se asigna dependiendo del origen su origen bacteriano. Para nombrarlas se utiliza una nomenclatura que consiste en:

Tres letras que corresponden al nombre científico del microorganismo (ej. Escherichia coli(Eco); Haemophilus influenzae(Hin)); y por ello las tres primeras letras del nombre se escriben en cursiva.
La cepa o...
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