Tipos de electroforesis

1. Tipos de electroforesis

Existen principalmente dos métodos electroforéticos ampliamente utilizados: la electroforesis convencional y la electroforesis capilar. La primera se lleva a cabo sobre papel o sobre un gel, en los que se aplica la muestra directamente. La disolución tampón, que será el medio conductivo, cubre la capa de papel o de gel. Seguidamente se aplica el potencial decorriente continua a través de la placa. Cuando se considera que se han completado las separaciones se interrumpe el paso de la corriente y, si es necesario, las muestras se tiñen para visualizarlas.

1.1 Electroforesis de frente móvil o libre

1.2. Electroforesis de zona:
• Electroforesis en papel

• Electroforesis en gel
Existe una gran variedad de tipos de electroforesis en gel, que sepueden agrupar en dos categorías:

a) Electroforesis en gel en una dimensión (continuo o discontinuo)

○ Electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE)
○ PAGE en condiciones desnaturalizante
○ PAGE en condiciones no desnaturalizantes
○ SDS – PAGE
○ Isoelectroenfoque
○ Electroforesis en campos pulsantes

b) Electroforesis en gel en dos dimensiones (bidimensional)


1.3Electroforesis capilar
1.3.1 Electroforesis capilar de zona (CZE)
1.3.2 Electroforesis capilar en gel (CGE)
1.3.3 Isotacoforesis capilar (CITP)
1.3.4 Isoelectroenfoque capilar (CIEF)
1.3.5 Cromatografía electrocinética capilar micelar (MEKC)

Explicaremos ahora las electroforesis más comunes, utilizadas en laboratorio:

○ SDS – PAGE
Permite el cálculo de parámetros moleculares, pues loscomplejos SDS-proteína se separan estrictamente según su tamaño molecular. El SDS interacciona con las proteínas formando complejos de características comunes independientemente de las de cada proteína. Las proteínas unen una molécula de SDS por cada dos aminoácidos, lo que implica que las cargas propias de las proteínas quedan enmascaradas o anuladas; asimismo, la molécula de SDS proporciona unacarga negativa, por lo que los complejos SDS-proteína están cargados negativamente de forma uniforme.
Como se comentó, la movilidad electroforética en una PAGE es función del tamaño y de la carga por unidad de masa; como ésta es constante para todos los complejos SDS-proteína, esta movilidad es solamente función de la masa molecular, es decir, cuanto menor sea la masa molecular de la proteína,mayor será la movilidad de la misma y viceversa.
En resumen, la SDS-PAGE es la electroforesis más utilizada para el análisis de proteínas debido a:
1 La gran mayoría de las proteínas son solubles en SDS.
2 Todos los complejos SDS-proteína tienen carga negativa y migran, por lo tanto, en el mismo sentido.
3 Su densidad de carga es muy elevada, por lo que su velocidad de migracióntambién lo es y las electroforesis son muy rápidas.
4 La separación depende de un parámetro físico-químico, como es la masa molecular, que se puede calcular.
5 Los complejos SDS-proteína se tiñen fácilmente.

Figura: Efecto del SDS y del DTT en la movilidad electroforetica de proteinas monomericas. En una proteina nativa de 25 KDa, carente de puentes disulfuro, el tratamiento con SDS(_____) o con SDS + DTT (--------) producen identico resultado. La proteina con un puente disulfuro intracatenario, en presencia de SDS se desnaturaliza parcialmente, manteniendo sin desplegar la zona que abarca el disulfuro. El tratamiento con SDS + DTT rompe el puente disulfuro y permite el despliegue total de la proteina.



○ Isoelectroenfoque
Es un tipo particular de electroforesis en laque los compuestos anfóteros se separan según su punto isoeléctrico (pI; pH al cual la carga neta de la proteína es nula) en un gradiente continuo de pH.
En todos los métodos electroforéticos descritos anteriormente, la difusión es un fenómeno con efectos negativos, que tiende a ensanchar las bandas, disminuyendo la resolución. En el EEF el efecto de la difusión es mínimo y por ello posee una...