Transformación con adn plasmidico

INTRODUCCIÓN A LA BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR
TRABAJO PRÁCTICO N°3

INTRODUCCION:

Las bacterias no tienen reproducción sexuada, pero cuentan con mecanismos de intercambio genético entreindividuos de la misma especie e incluso entre distintas especies. Dichos mecanismos se dividen en tres: transformación, conjugación y transducción.
En este TP el mecanismo de interés es latransformación bacteriana, que consiste en la adquisición por una célula bacteriana de DNA desnudo foráneo proveniente del medio extracelular. Este DNA dentro de la célula puede ser degradado o incorporado alcromosoma por recombinación. Si el DNA incorporado se trata de un plásmido puede quedar como un elemento replicativo autónomo dentro de la célula.
Las bacterias capaces de captar DNA desnudo foráneo delmedio extracelular son llamadas competentes. Dicho estado de competencia en la naturaleza está generalmente asociado al crecimiento rápido y falta de nutrientes, y es transitorio. In Vitro, el estadode competencia es inducido mediante técnicas empíricas.

OBJETIVOS:
Realizar la transformación de E. coli usando como DNA foráneo el plásmido purificado en el TP 1.

PROCEDIMIENTO

1)Recibimos 3 tubos eppendorf(en hielo) conteniendo 50 µl de solución de bacterias con CaCl2(en solución los iones se disocian,los cationes de Ca 2+ y neutralizan las cargas negativas de los fosfatos delADN y de los fosfolipidos de la membrana bacteriana, disminuyendo de esta manera la repulsión natural de estas biomoleculas) , y 2 tubos eppendorf conteniendo DNA plásmidico. Uno con el DNA plasmidicopurificado por nosotras y el otro purificado por las docentes (plásmido control de concentración conocida).
2) Hicimos una dilución 1/100 del plásmido purificado en el TP 1. Para disminuir elmargen de error, realizamos dos diluciones seriadas 1/10, tomando primero 2 µl de la solución del plasmido extraído y agregándole 18 µl de H2Od y al producto de esa dilución le sacamos 2 µl y le...