Transformación De Levaduras

Transformación de Levaduras
Material:
|Cepa a transformar |Medio YPD liquido |
|Plásmido (cuantificado)|Cajas de medio SC sin la auxotrofía |
|Matraz de 50 mL estéril |Espectrofotómetro|
| |Centrifuga. |
|Agua estéril| |
|Acetato de Litio 1 M ||
|PEG(PoliEtilenGlicol) PM 3350 al 50% | |
|ADN de esperma de salmon (2mg/mL o 10 mg/mL) | |
|Buffer TE (Tris-EDTA) ||
|DMSO(DiMetil SulfOxido) | |

Colocar en incubación a 30ºC por 24 horas, un precultivo de la cepa a transformar en YPD.

Al día siguiente inocular 2 mL del cultivo en 30 mL de medio YPD. Incubar a 30( C con agitación, hasta que la D.O. (600 nm) alcanceentre 0.6-0.8

Centrifugar en tubos Eppendorf 10 mL del cultivo a 3000 rpm por 5 minutos.

Resuspender todos los botones de los tubos en 1 mL de agua estéril y lavar.

Resuspender en 1 mL de aguaestéril.

Centrifugar a 3000 rpm por 5 minutos.

Resuspender en 300 (L de Acetato de Litio 100 mM (Fresco diluido con agua de un stock 1 M) (300 (L para 6 a 8 reacciones de transformación)...