transformacion vegetal
Páginas: 71 (17602 palabras)
Publicado: 17 de noviembre de 2013
Agrobiotecnología. Curso 2011
Sistemas de transformación vegetal
Sistemas de transferencia genética en plantas
Transparencias 3-6
Antes de elegir un sistema de transformación vegetal, es importante establecer un protocolo de cultivo de tejidos y de regeneración de las plantas. Este protocolo es parte integral de la mayoría de las estrategias de transformación y es generalmente elaspecto más exigente de las mismas. La clave para integrar exitosamente las técnicas de cultivo de tejidos dentro en una estrategia de transformación es la obtención de un sistema de regeneración rápido y eficiente. No todos los protocolos de regeneración son compatibles con todas las técnicas de transformación. Mientras una gran variedad de estrategias de regeneración y transformación sonaplicables a muchos cultivos, se requieren protocolos muy particulares y específicos para la modificación de determinadas especies. En términos generales, algunos protocolos son claramente más eficientes que otros. Por ejemplo, la regeneración de embriones maduros a partir de embriones somáticos es el método más adecuado para la regeneración de especies monocotiledóneas. Por lo tanto, establecer una buenaestrategia de regeneración y cultivo de tejidos es primordial antes de implementar una técnica de transformación. La transparencia 4 muestra un diagrama de flujo orientativo para establecer un protocolo de transformación. Primero, hay que identificar el tejido o células de las que se puede regenerar una planta, establecer los agentes de selección apropiados, las hormonas requeridas, los medios decultivos adecuados para desarrollar una regeneración eficiente de plantas enteras y fértiles (recuadro superior de la transparencia 4). Una vez establecidos estos parámetros hay que realizar las construcciones genéticas, y recién entonces determinar el sistema de más apropiado para la introducción del material genético y establecer los principales parámetros del procedimiento correspondiente(recuadro inferior).
La transformación de plantas se refiere al evento de introducir e integrar ADN foráneo en células vegetales y regenerar plantas transgénicas. La transparencia 6 enumera las diferentes técnicas de transformación de plantas que se han desarrollado con el objeto de hacer más fácil y eficiente esta metodología. Los sistemas de trasferencia pueden dividirse en dos grupos:Sistemas basados en vectores biológicos:
Transferencia mediada por Agrobacterium
Transferencia basada en virus vegetales.
Sistemas de transferencia directa de ADN, sistemas basados en transferencia física, surgidos como alternativa para transformar especies monocotiledóneas que no son hospedantes naturales de Agrobacterium:
Transferencia por bombardeo de partículas o biobalística.
Transferenciapor cationes divalentes y/o electroporación.
Transferencia con whiskers de carburo de silicio.
Transferencia por microinyección.
Los métodos de transformación desarrollados permiten la expresión transitoria o la expresión estable del ADN introducido. La expresión transitoria ocurre durante un período corto de tiempo (pocos días) o hasta culminar el ciclo de vida de la planta, pero no esheredable por la progenie. La expresión estable permite la integración del ADN foráneo al genoma vegetal y la consiguiente transmisión a las siguientes generaciones.
Biología de Agrobacterium tumefaciens
Transparencias 7-19
Pese al desarrollo de otros métodos para la transferencia de genes, el método más difundido es la transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens. A. tumefacienses una bacteria del suelo gram negativa que ataca a un amplio rango de plantas dicotiledóneas. Muchas especies agronómicamente importantes han sido transformadas usando esta bacteria del suelo (micrografía de la transparencia 8) y la lista de especies susceptibles a la transformación por Agrobacterium se incrementa continuamente. La fotografía del panel inferior de la transparencia 8 muestra un...
Sistemas de transformación vegetal
Sistemas de transferencia genética en plantas
Transparencias 3-6
Antes de elegir un sistema de transformación vegetal, es importante establecer un protocolo de cultivo de tejidos y de regeneración de las plantas. Este protocolo es parte integral de la mayoría de las estrategias de transformación y es generalmente elaspecto más exigente de las mismas. La clave para integrar exitosamente las técnicas de cultivo de tejidos dentro en una estrategia de transformación es la obtención de un sistema de regeneración rápido y eficiente. No todos los protocolos de regeneración son compatibles con todas las técnicas de transformación. Mientras una gran variedad de estrategias de regeneración y transformación sonaplicables a muchos cultivos, se requieren protocolos muy particulares y específicos para la modificación de determinadas especies. En términos generales, algunos protocolos son claramente más eficientes que otros. Por ejemplo, la regeneración de embriones maduros a partir de embriones somáticos es el método más adecuado para la regeneración de especies monocotiledóneas. Por lo tanto, establecer una buenaestrategia de regeneración y cultivo de tejidos es primordial antes de implementar una técnica de transformación. La transparencia 4 muestra un diagrama de flujo orientativo para establecer un protocolo de transformación. Primero, hay que identificar el tejido o células de las que se puede regenerar una planta, establecer los agentes de selección apropiados, las hormonas requeridas, los medios decultivos adecuados para desarrollar una regeneración eficiente de plantas enteras y fértiles (recuadro superior de la transparencia 4). Una vez establecidos estos parámetros hay que realizar las construcciones genéticas, y recién entonces determinar el sistema de más apropiado para la introducción del material genético y establecer los principales parámetros del procedimiento correspondiente(recuadro inferior).
La transformación de plantas se refiere al evento de introducir e integrar ADN foráneo en células vegetales y regenerar plantas transgénicas. La transparencia 6 enumera las diferentes técnicas de transformación de plantas que se han desarrollado con el objeto de hacer más fácil y eficiente esta metodología. Los sistemas de trasferencia pueden dividirse en dos grupos:Sistemas basados en vectores biológicos:
Transferencia mediada por Agrobacterium
Transferencia basada en virus vegetales.
Sistemas de transferencia directa de ADN, sistemas basados en transferencia física, surgidos como alternativa para transformar especies monocotiledóneas que no son hospedantes naturales de Agrobacterium:
Transferencia por bombardeo de partículas o biobalística.
Transferenciapor cationes divalentes y/o electroporación.
Transferencia con whiskers de carburo de silicio.
Transferencia por microinyección.
Los métodos de transformación desarrollados permiten la expresión transitoria o la expresión estable del ADN introducido. La expresión transitoria ocurre durante un período corto de tiempo (pocos días) o hasta culminar el ciclo de vida de la planta, pero no esheredable por la progenie. La expresión estable permite la integración del ADN foráneo al genoma vegetal y la consiguiente transmisión a las siguientes generaciones.
Biología de Agrobacterium tumefaciens
Transparencias 7-19
Pese al desarrollo de otros métodos para la transferencia de genes, el método más difundido es la transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens. A. tumefacienses una bacteria del suelo gram negativa que ataca a un amplio rango de plantas dicotiledóneas. Muchas especies agronómicamente importantes han sido transformadas usando esta bacteria del suelo (micrografía de la transparencia 8) y la lista de especies susceptibles a la transformación por Agrobacterium se incrementa continuamente. La fotografía del panel inferior de la transparencia 8 muestra un...
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