Vaciado en placa

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL Dra. Keiko Shirai Práctica No.4 "Aislamiento de bacterias por el método de dilución en placa”

Objetivos
Aprender la técnica de dilución para el aislamiento ycuenta en placa de diferentes fuentes de inóculo. INTRODUCCIÓN Dentro del grupo de recuentos microbianos a base de cultivos con formación de colonias, la técnica por vaciado en placa es la masutilizada. La muestra en cantidades conocidas se deposita en cajas petri estériles, y se adiciona el medio de cultivo fundido a una temperatura de 45° y se mezcla con la muestra. C Después de la incubaciónse cuentan las colonias desarrolladas las que multiplicadas por el inverso de la dilución que corresponda permite estimar el número de microorganismos viable por gramo o mL de muestra, obviamente conlas condiciones de prueba (medio de cultivo, condiciones fisicoquímicas y tipo de colonias contadas), el recuento obtenido se referirá a determinado grupo de microorganismos. Esta técnica permite lamayoría de las veces cuantificar la contaminación en alimentos, medicamentos. MATERIAL REACTIVOS Tubos de rosca Cloruro de sodio Gradilla Agar nutritivo Mechero Juegos de tinción de Gram Cajas petriPipetas de 1 y 10 ml Cilindro para esterilizar pipetas Parrilla Agitadores magnéticos 1 probeta de 100 ml Vaso de precipitados 1000 ml Matraz erlenmeyer de 2000 ml Balanza analítica Microscopio de luzPortaobjetos Cubreobjetos Gasa Algodón Papel de estraza Cuenta colonias Material que deben traer los alumnos: muestras (por ejemplo pulque, agua residual, bebidas refrescantes, yogurt), franela,masking-tape, algodón, gasa, alcohol.

METODOLOGÍA 1.- Preparación de reactivos y medio de cultivo: a) Solución isotónica: Pesar 0.09 g de NaCl y disolviendo en 100 ml de agua destilada b) Agar nutritivo:Preparar 200 ml de medio siguiendo las indicaciones del reactivo. 2.- Envolver cajas de petri y pipetas. 3.- Colocar en un tubo de rosca 9 ml y en el resto 9.9 ml de solución isotónica. 4.-...