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Introducción
Para todo trabajo de investigación relacionado con el área de la bioquímica es de vital importancia el manejar o tener conocimiento de diferentes técnicas básicas o comúnmente utilizadas en un método experimental, tal es el caso de la espectrofotometría.
Dicha espectrofotometría se basa en la capacidad que tienen las moléculas o soluciones en la absorción de ondaselectromagnéticas. Es importante señalar que cada solución posee una medida de absorción de longitud de onda específica, lo que se conoce también como espectro de absorción.(1)

Esta técnica cobra vital importancia debido a la cantidad de información que es posible obtener en su aplicación. Ya sea tanto en un estudio cualitativo o cuantitativo de las soluciones que se utilizarán en un laboratorio, como tambiénen la determinación de las impurezas que presenten.(2)
En el siguiente laboratorio se utilizará dicha técnica para determinar la concentración de diferentes soluciones utilizando un espectrofotómetro, del cual se obtendrán diferentes valores de absorbancia, los cuales serán determinantes en el cumplimiento de los objetivos planteados en el práctico.
Es importante señalar que la eleccióndel espectrofotómetro no se debe a una mera elección ya que podemos encontrar una variedad de ventajas en su utilización, las cuales son determinantes a la hora de elegir el equipo de medición para realizar una espectrofotometría. Dentro de las ventajas podemos encontrar en que su uso permite la determinación de la absorbancia considerando una mayor variedad de zonas del espectro (visible,infrarrojo y ultravioleta), además de su fácil uso y de la precisión de los resultados que se obtienen.

Objetivos:
* Aprender a manejar correctamente un espectrofotómetro.
* Comprender y determinar experimentalmente, conceptos como máximo de absorción y espectro de absorción.
* utilizar correctamente la ley de Lamber-Beer y obtener el coeficiente de extinción molar del azul de metileno.* A través de cálculos de concentración, versus absorbancia, corroborar la linealidad entre ambos según Lamber-Beer, y según esto, calcular la concentración de una muestra problema.

Resultados:
Actividad practica 1:
Longitud de onda (nm) | Absorbancia |
450 | 0,110 |
500 | 0,238 |
550 | 0,619 |
600 | 2.000 |
650 | 2,000 |
700 | 0.613 |
750 | 0,050 |

Calculo decoeficiente de extinción molar:
Absorbancia = ɛ X C X l
2,000 = ɛ X (9,770X10-5Mol/Lt) X 1 Cm
ɛ = 20470,839 (Lt/molxcm)

Actividad practica 2:
Calculo de concentraciones:
Concentración inicial (M):
3,125x10-5mg/ml 1mol319,85gr/ml = 9,770x10-5 M
Disolución | Concentración mg/Lt. | Molaridad | Absorbancia |
1 | 1,562x10-2 | 4,880x10-5 | 1,769 |
2 | 7,812x10-3 | 2,440x10-5 | 0,971 |
3 |3,906x10-3 | 1,235x10-5 | 0,452 |
4 | 1,953x10-3 | 6,096x10-6 | 0,220 |
5 | 9,750x10-4 | 3,048x10-6 | 0,134 |

Grafico de Absorbancia v/s concentración:


Actividad practica 3:

- A una absorbancia de 1,725 corresponde una concentración de 0,0000462 M
0,0000462mol/lt x 319, 85 gr = 0,014 mg/ml.
Discusión:
-En estudios científicos, siempre se está expuesto a errores tanto humanos comoinstrumentales, llama la atención, en la actividad número uno, con la determinación del máximo de absorbancia, que al obtener este valor (2), este se repite para dos concentraciones diferentes, tanto como para longitudes de onda a 600 como a 650 nm, esto se explica, con lo que se mencionó anteriormente, un error instrumental, ya que la máxima absorbancia que pueden medir algunos espectrofotómetroses de 2, lo que ocurrió en este caso. Para solucionar este problema, que nos afectaría en la actividad número dos, en la cual debíamos usar la longitud de onda que correspondía al máximo de absorbancia, poseíamos dos soluciones, una, hacer un promedio de ambas longitudes de onda, o dos, que fue la que se utilizo, simplemente elegir una, de la cual determinamos que lo más adecuado sería utilizar...