Visualización de adn

INTRODUCCIÓN
El siglo XXI es una época apasionante para la biología celular. Los nuevos métodos para el análisis y la manipulación de DNA, el RNA y las proteínas dan lugar a la explosión de información que nos permite estudiar los genes y las células de formas antes no imaginables. Estas nos ayudan a descifrar información, nos permiten no solo recopilar enormes catálogos de genes yproteínas, si no comenzar a desenmarañar como trabajan conjuntamente estos componentes en las células y organismos funcionales. La clonación a través de las genotecas de DNA fue al comienzo del único camino para aislar un gen y aun se utiliza en la secuenciación de genomas completos y cuando deben manipularse genes muy grandes (Alberts et al., 2011).
Para la amplificación de DNA, se debe sintetizarquímicamente dos cebadores de oligonucleótidos completamente 18 bases que flaquean la región de interés. La reacción completa está compuesta de una mezcla compleja de DNA de hebra doble (en general DNA genómico que contiene la secuencia diana de interés), un exceso estequiométrico de ambos cebadores, los cuatro desoxinucleosidos trifosfatos, y una DNA polimerasa estable al calor conocida como Taqpolimerasa (Lodish et al., 2005).
Si las secuencias de nucleótidos en los extremos de una región de DNA en partículas se conocen, el fragmento intermedio puede amplificarse directamente por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (ibídem). La PCR se invento en la década de 1980 y puede producirse enteramente in vitro sin el uso de células. Con esta técnica se puede seleccionar una secuenciaespecifica de nucleótidos para replicarse en forma selectiva y rápida en grandes cantidades a partir de cualquier muestra de DNA que la contenga (Alberts et al., 2011). Esta se basa en la amplificación de esas secuencias por medio de una enzima polimerasa que es estable en condiciones de temperaturas tan altas como para desnaturalizar el DNA (Paniagua, 2003).
La polimerasa es guiada hasta la secuencia aser copiada por cortos oligonucleótidos cebadores que se agregan a la reacción y se hibridan al molde de ADN al comienzo de la secuencia de DNA deseada (Alberts et al., 2011). Se utilizan cebadores diferentes para cada uno de los dos extremos del fragmento del DNA porque las dos hebras de DNA se disponen con direcciones opuestas y son copiadas en direcciones opuestas, ya que la replicación siemprese realiza en el sentido 5´  3´ (Panniagua, 2003).
La PCR tiene una gran potencia en la medicina forense. Su extremada sensibilidad hace posible que funcione con muestras muy pequeñas –mínimas trazas de sangre y tejido que pueden contener los restos de tan solo una célula- y obtener una huella genética de DNA (DNA fingerprit) de la persona de quien proviene (Alberts et al., 2011).

OBJETIVOSPoder manipular la reacción en cadena de la polimerasa para amplificar fragmentos de ADN, para su posterior estudio.
Aprender a manejar el material necesario para la visualización de los fragmentos de ADN amplificados por la reacción en cada cadena de polimerasa.
METODO
1. Colocar en tubos eppendorf 25 µ las muestras de ADN (escena del crimen y ADN de los sospechosos).
2. A cada muestra deADN añadirle 20 µ de Master Mix y 120 µ Primer (MMP).
3. Posteriormente colocar las muestras en la PCR durante 30 min posteriormente colocarlas en el refrigerador.
4. Hacer 150 ml de agarosa al 3% en buffer TAE 1X.
5. Verter la solución anterior en el molde correspondiente, insertar el peine y dejar melificar.
6. Colocar el gel en la cámara y añadir buffer TAE 1X como amortiguador decorrimiento. Retirar el peine cuidando que no se formen burbujas en las cavidades formadas.
7. Sacar las muestras del refrigerador y descongelarlas con el calor de las manos.
8. Se mezcla 10µl del ADN más 2µl del amortiguador de carga y homogenizar.
9. Depositar las muestras en las cavidades del gel, habiendo depositado también un marcador de peso molecular.
10. Realizar el corrimiento a 80 V...