bioquimica

Ensayo de laboratorio para determinar la actividad agonista o antagonista de nuevas moléculas.

Abstract

Se utilizaran células embrionarias de riñón humanos que expresan el receptor TLR4 quecontienen gen SEAP midiéndose por reacción colorimétrica. Procederemos a extracción RNA, cuantificando la cantidad por espectrofotometría sometiendo a una reacción de retro transcripción y a PCR. Parafinalmente visualizar los ácidos nucleicos en gel agarosa.

Introducción

A. RECEPTORES TLR4:

1. En qué células se expresan:
Se encuentra en la superficie celular de
• monocitos/macrófagos
•células dendríticas mieloides
• mastocitos
• linfocitos B

2. Estructura:
Son glicoproteínas transmembranas de tipo I. Tienen un dominio llamado TIR que inicia la vía de señalización por lacual los receptores afectan la actividad celular en la presencia de sus ligandos. Este dominio se une a otros dominios TIR en proteínas adaptadoras como MyD88, permitiendo que la señal sigatransmitiéndose. Sus dominios N-terminales extracelulares, contienen segmentos repetidos ricos en leucina (LRRs). Se codifican en genes somáticos no recombinados. Después de unirse a sus ligandos, los TLRs formanheterodímeros o homodímeros, un paso esencial en su activación.

3. Ligandos naturales e interacción con otras proteínas:
Sus ligando naturales son: lipopolisacáridos, proteínas de choque térmico,fibrinógeno, fragmentos de heparán sulfatos y ácido hialurónico, niquel y varios opioides.


4. Vía de señalización que se activa:
Activa, junto a los TLR3, la vía de MyD88-independiente.


5.Procesos implicados:
Involucra al adaptador TRIF, que también contiene un dominio TIR. Como MyD88, TRIF activa TRAF-6 y así promueve la producción del factor de transcripción NFκB. TRIF tambiénactiva IRF-3, que induce la transcripción de IFN-β. Señalización a través de TLR-3, que reconoce ARN de doble cadena, siempre produce IFN, una proteína específicamente dirigida contra los virus, ya que...