Bradford

El ensayo de proteínas Bradford es un espectroscópicas procedimiento analítico utilizado para medir la concentración de proteína en una solución. It is subjective, ie , dependent on the amino acid composition of the measured protein. Es subjetivo, es decir, depende de la composición de aminoácidos de la proteína medida. The Bradford protein assay was developed by Marion M. Bradford . El ensayo deproteínas Bradford fue desarrollado por Marion M. Bradford .

Principio

The Bradford assay, a colorimetric protein assay , is based on an absorbance shift of the dye Coomassie Brilliant Blue G-250 in which under acidic conditions the red form of the dye is converted into its bluer form to bind to the protein being assayed. El ensayo de Bradford, un colorimétrico proteína de ensayo , se basaen una absorbancia cambio del colorante Coomassie Brilliant Blue G-250 en el que bajo condiciones ácidas se convierte en la forma roja del colorante azul en su forma de unirse a la proteína que se analizaron. During the formation of this complex, two types of bond interaction take place: the red form of Coomassie dye first donates its free electron to the ionizable groups on the protein, whichcauses a disruption of the protein's native state, consequently exposing its hydrophobic pockets. Durante la formación de este complejo, dos tipos de interacción de bonos llevará a cabo: la forma roja de Coomassie dona primer tinte de su electrón libre a los grupos ionizables de la proteína, lo que provoca una interrupción del estado nativo de la proteína, por lo tanto la exposición de su hidrofóbicobolsillos. These pockets on the protein's tertiary structure bind non-covalently to the non-polar region of the dye via van der Waals forces , positioning the positive amine groups in proximity with the negative charge of the dye. Estas bolsas de la proteína de estructura terciaria se unen no covalentemente a la región no polar de la tinta a través de van der Waals , el posicionamiento de losgrupos amina positivo en la proximidad con la carga negativa de la tintura. The bond is further strengthened by the ionic interaction between the two. El vínculo se ve reforzado por la interacción iónica entre los dos. The binding of the protein stabilizes the blue form of the Coomassie dye; thus the amount of the complex present in solution is a measure for the protein concentration, and can beestimated by use of an absorbance reading. La unión de la proteína se estabiliza el formulario azul del colorante Coomassie, por lo que el monto de la presente complejo en solución es una medida de la concentración de proteínas, y puede ser estimada mediante el uso de una lectura de absorbancia.
The (bound) form of the dye has an absorption spectrum maximum historically held to be at 595 nm . Laforma (obligada) de la tintura tiene un espectro de absorción máxima históricamente considerada a 595 nm . The cationic (unbound) forms are green or red. El catiónico (libre) las formas son de color verde o rojo. The binding of the dye to the protein stabilizes the blue anionic form. La unión del colorante a la proteína estabiliza el color azul aniónicos formulario. The increase of absorbance at 595nm is proportional to the amount of bound dye, and thus to the amount (concentration) of protein present in the sample. El aumento de absorbancia a 595 nm es proporcional a la cantidad de colorante unido, y por lo tanto a la cantidad (concentración) de proteína presente en la muestra.
Unlike other protein assays, the Bradford protein assay is less susceptible to interference by various chemicalsthat may be present in protein samples. A diferencia de los ensayos de otra proteína, la proteína de ensayo Bradford es menos susceptible a la interferencia de varias sustancias químicas que pueden estar presentes en las muestras de proteínas. An exception of note is elevated concentrations of detergent . Sodium dodecyl sulfate (SDS), a common detergent, may be found in protein extracts because...