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Stvdia Botánica 13: 115-121, 1994

COEFICIENTES DE EXTINCIÓN DE CLOROFILAS
Y FEOFITINAS (a y b) EN DMSO Y ECUACIONES
PARA EL CÁLCULO DE SUS CONCENTRACIONES
S. DEL VALLE TASCÓN, M. J. SANZ, A. CALATAYUD & E. BARRENO
Dpto. de Biología Vegetal, Fac. Ciencias Biológicas, Universitat de Valencia. 46100 Burjassot,
Valencia, España.
RESUMEN: Se han observado inconsistencias en las fórmulasutilizadas en la determinación de clorofilas (Chl) en dimetilsulfóxido (DMSO), estas fórmulas fueron calculadas para Chl disuelta en acetona (80%). Los coeficientes de extinción (E) de clorofila a
(Chl a), clorofila b (Chl b) y feofitina b (Phaeo b) se han obtenido por regresión lineal.
Palabras clave: clorofilas, feofitinas, DMSO.

INTRODUCCIÓN
Los pigmentos fotosintéticos son habitualmentedeterminados por métodos espectrofotoméricos en solventes orgánicos (BRUISNA, 1963; HOLDEN, 1976; MCKINNEY,
1941; VERNON, 1960).
La acetona (80%) ha sido el solvente más utilizado para la extracción de clorofilas
(ARNON, 1949; Moss, 1967) ya que el coeficiente de extinción ha sido cuidadosamente
calculado (MCKINNEY, le; VERNON, l.c; LICHTENTHALER, 1987).
La extracción con acetona (80%) requieretriturar el material vegetal y posterior
centrifugación. Este tipo de extracción puede dar lugar a errores en la determinación de
clorofilas (JOSLYN & MCKINNEY, 1938; MORETH & YENTSCH, 1970); por otro lado, la
presencia de productos de degradación convierte en inestables estos extractos. SCHOAF
& LlUM (1976) demostraron que el solvente DMSO es más adecuado que la acetona
(80%) en la extracciónde pigmentos fotosintéticos en varias especies de algas. Sin
embargo, los coeficientes de extinción de clorofilas en DMSO no han sido publicados y
se han utilizado los E obtenidos para la acetona (80%) (ROÑEN & GALLUN, 1984).

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S. DEL VALLE TASCÓN, M. J. SANZ, A. CALATAYUD & E. BARRENO

MATERIALES Y MÉTODOS
Las medidas espectrofotométricas se realizan con un espectrofotómetro Simadzumodelo 240 con 2.0 nm de rendija y paso de luz de 10 mm. La posición de las longitudes de onda en el espectrofotómetro se calibran con un filtro de óxido de holmio. Cuatro
lotes de 1 mg de Chl a (esencialmente libre de Chl b) y cuatro lotes de 1 mg de Chl b
(esencialmente libre de Chl a) se disuelven en 0.5 mL de etanol. 10-20 uL de esta solución se añaden a 3.0 mL de acetona (80%) ó DMSO; laconcentración de etanol en estas
soluciones es inferior a 0.7% (v/v) y por ello su afecto en el espectro de absorción se
considera despreciable. La concentración de Chl en Acetona (80%) se calcula empleando los E dados LICHTENTHALER (1989) y la concentración de Chl a y b en las soluciones originales se calcula con esta referencia. Los E en DMSO se calculan por regresión
lineal. La conversión deChl a Phaeo se realiza mediante la adición de 15 uL de HC1
10.1 N a 3.0 mL de solución.
OBSERVACIONES
& GALLUN (1984) sugirieron que el espectro de absorción de las Chl en
DMSO era igual al obtenido en acetona (80%) y que por tanto las ecuaciones de ARNON
(1941) se podían utilizar en los extractos de DMSO empleando la absorción a 663 nm en
lugar de la absorción a 665 nm. Dado que no sepresentan estadísticos, sino únicamente
un espectro de absorción, la validez de estas ecuaciones se comprueba con soluciones de
Chl a y b puras (Tabla 1).
ROÑEN

Referencia

Long de onda
(nm)

E

Concentración
(ug/ml)

Lichtenthaler
(1987)
McKinney
(1941)
Vernon
(1960)

663.2
646.8
663.0
645.0
665.0
649.0

86.30
20.49
82.04
16.75
90.80
23.40

1.497±0.0231.521±0.024
1.575±0.024
1.600±0.055
1.499±0.021
1.579±0.047

Lichtenthaler
(1987)
McKinney
(1941)
Vernon
(1960)

663.2
646.8
663.0
645.0
665.0
649.0

11.20
48.18
9.27
45.60
10.80
52.50

2.146±0.103
1.041±0.048
2.105±0.101
1.049±0.045
1.807±0.086
0.999±0.047

Tabla 1. Concentraciones de Chl a (1.703±0,026 mg/ml) y de Chl b (1.164+0,048 mg/ml) en DMSO
empleando el E dado...