determinacion del grupo amino terminal de la hemoglobina

 INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DETERMINACIÍON DEL GRUPO AMINO TERMINAL DE LA HEMOGLOBINA
4QM2 Sección 1Serrano Valdez Monica Ivonne
Cortes Eduardo Gabriel

INTORUCCIÓN
Frederick Sanger comenzó a trabajar en la secuenciación de proteínas en 1943, utilizando la química orgánica clásica, susprimeros experimentos se dirigían a diseñar un método mejor para cuantificar los grupos amino libres como los correspondientes segmentos N-terminal de un polipéptido.
Fig.1 Reacción de2,4-dinitrofluorobeceno (DNFB) con el polipéptido.
Utilizó un reactivo llamado 2,4-dinitrofluorobenceno, que forma un derivado dinitrofelino (DNP) amarillo con los grupos amino terminales sin cortar ningún enlacepeptídico.
Cuando la proteína se hidroliza posteriormente para cortar los enlaces peptídicos, el aminoácido N-terminal retiene su marca DNP y puede identificarse separando los productos de la hidrolisismediante una cromatografía. Sanger observó que algunos DNP derivados de los aminoácidos eran inestables frente a la hidrólisis, por lo que este paso debía acortarse. Comparando los resultados obtenidoscon los tiempos de hidrólisis cortos y largos, Sanger observó manchas amarillas adicionales que correspondían a dipéptidos u otros péptidos pequeños con sus enlaces peptídicos intactos. Entonces pudoaislar los dipéptidos e identificar el segundo residuo. La genialidad de Sanger fue reconocer que determinando las secuencias de péptidos pequeños que se superponían, obtenidos de una proteínahidrolizada parcialmente, podía hallarse la secuencia de la proteína intacta.
El análisis N-terminal revela el número de tipos diferentes de subunidades. Cada cadena polipeptídica (sino está bloqueadaquímicamente) tiene un residuo N- terminal. Si se identifica este grupo final se puede establecer el número de polipéptidos diferentes desde el punto de vista químico de la proteína. Se puede determinar...