DIAPOS DE ESPECTOFOTOMETRIA

ESPECTROFOTOMETRI
A
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ESPECTROFOTOMETRI
A
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 La espectrofotometría es el método de análisis
óptico más usado en las investigaciones
biológicas. El espectrofotómetro es un
instrumento que permite comparar la
radiación absorbida o transmitida por una
solución que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene
una cantidad conocida de la misma sustancia.

MÉTODOS FOTOMÉTRICOSDE
ANÁLISIS

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1.- NATURALEZA DE LA RADIACIÓN
ELECTROMAGNÉTICA:
a) Longitud de onda (l): es la distancia entre dos
máximos de un ciclo completo del movimiento
ondulatorio. Se expresa, según el S.I. en nanómetros
(nm) y sus equivalencias son: 1nm = 1mm =10 A0 =
10-9 m.
b) Frecuencia (n): es el número de ciclos por
segundo. Es inversa a la longitud de onda. Su fórmula
es: n = c/l, y se mide en ciclospor segundo o
hertzios.

c)Fotones: la luz está formada por fotones, y estos
son paquetes discontinuos de E. La E de un fotón
depende de la frecuencia y de la longitud de
onda,  La Energía Electromagnética se mide el
Ergios. La relación entre la longitud de onda y la
Energía es inversa, por lo tanto a menor longitud de
onda mayor Energía y viceversa.
d) Espectro Electromagnético: cubre unamplio
intervalo de E radiante, desde los rayos g de
longitud de onda corta hasta las ondas de radio, de
longitud de onda larga. Se divide en varias
regiones, las más interesantes para nosotros son:
 Región Ultravioleta: l = 10-380 nm
 Región Visible: l = 380-780 nm
 Región Infrarroja: l = 780-30.000 nm

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2.     FENÓMENOS DE INTERACCIÓN
ENTRE LUZ Y MATERIA

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A. FENÓMENO DE ABSORCIÓN
Cuando unapartícula que se encuentra en estado de
reposo o estado fundamental interacciona con un
haz de luz, absorbe E y se transforma en una
partícula en estado excitado. La molécula absorbe la
E de la onda y aumenta su energía, y ese aumento
de energía es igual a la E de la Radiación
Electromagnética absorbida (E = h.n). La partícula
en estado excitado tiende a volver de forma
espontánea a su estado dereposo desprendiendo la
E absorbida en forma de calor.

B. FENÓMENO DE EMISIÓN

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 Algunos compuestos, tras ser excitados por la
luz, vuelven al estado fundamental
produciendo la emisión de energía radiante.
En este caso, lo que se mide es la energía
emitida y, en este fenómeno se basa la
“fotometría de llama” o la “fluorescencia”.

3.     LEYES DE
ABSORCIÓN
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 Cuando un haz de luz pasa a travésde un
medio, se registra una cierta pérdida de
intensidad, debido a la absorción por parte de
la sustancia.
 Se llama “TRANSMITANCIA (T)” a la relación
entre la luz incidente y la luz transmitida:
 T = Is / I0  ;    %T = (Is / I0 ) x 100.

3.1. LEY DE BEER
 En óptica, la ley de Beer-Lambert, también
conocida como ley de Beer o ley de BeerLambert-Bouguer es una relación empírica que
relacionala absorción de luz con las propiedades
del material atravesado.
“La absorbancia de una solución es directamente
proporcional ala concentración y a la longitud del
paso de la luz”.
A = e . b. c

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TRANSMITANCIA
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 La figura muestra un haz de radiación paralela antes y
después de que ha pasado a través de una capa de
solución que tiene un espesor de b cm y una
concentración c de una especieabsorbente. Como
consecuencia de interacciones entre los fotones y las
partículas absorbentes, la potencia del haz es atenuada.

ABSORBANCIA
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 La
  absorbancia A de una solución se define
mediante la ecuación:
A= -log T = log

Curva de Calibración
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4.  ESPECTROFOTÓMETR
O

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 Se distinguen dos tipos de aparatos:
  Fotómetro o Colorímetro: se caracterizan
porque utilizan filtros que solopermiten el
paso de una determinada longitud de onda.
 Espectrofotómetros: utilizan cromadores. Con
ellos se obtiene un haz de luz monocromático
cuya longitud de onda se varía a voluntad. Los
monocromadores pueden ser de dos tipos:
prismas y redes de difracción.

COMPONENTES DEL
ESPECTROFOTÓMETRO

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 1. Fuente de luz: proporciona energía
radiante en forma de luz visible o no visible.
TIPOS DE...