Enzimas En El Diagnostico De Enfermedades Genéticas E Infecciones

ENZIMAS EN EL DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES GENÉTICAS E INFECCIONES:
Existen variedad de enzimas para el diagnóstico de enfermedades genéticas e infecciones que están en desarrollo. Estas enzimas en su mayoría sirven como marcadores uniéndose a un sitio de anclaje determinado haciendo las veces de epítopo.
Existen diferentes clases como las isoenzimas que son subunidades que viene de dos locigenéticos diferentes en distintas combinaciones para formar la enzima polimerica activa.
Como isoenzima mas importantes tenemos la creatinfosfoquinasa es una enzima que se encuentra en concentraciones elevadas en el tejido muscular tanto esquelético como cardíaco y en menor concentración en otros tejidos. Se puede dividir en tres isoenzimas: MM, MB, y BB, y se la emplea tanto en el diagnóstico deinfarto agudo de miocardio, en las miopatías congénitas y en cuanto a modo de medida confiable de enfermedades inflamatorias musculares.
La lactato deshidrogenasa sirve para el diagnóstico de daño tisular en muchos tejidos del cuerpo, como el corazón, el hígado, los riñones, el músculo esquelético, el cerebro, las células sanguíneas y los pulmones.

Las aminotransferasas son usadas para eldiagnóstico no invasivo de fibrosis hepática en niños y adolescentes y enfermedades hepáticas grasas no alcohólicas.
La fosfatasa ácida tartrato-resistente es un examen efectuado en las células sanguíneas o en la médula ósea (biopsia) para confirmar un diagnóstico de leucemia de células pilosas o tricoleucemia. Asimismo, este examen se puede realizar en el plasma sanguíneo para buscar signos dedescomposición ósea.
Las amilasas que ayudan en el diagnóstico de pancreatitis aguda (excepto en necrosis fulminante). En la úlcera gástrica penetrante en páncreas y en la parotiditis.

2. La tecnología del ADN recombinante ha hecho posible investigar más a fondo la estructura y función de los genes, especialmente de los genes eucarióticos que eran inaccesibles por otros métodos.
La técnica deADN recombinante requiere en primer lugar enzimas de restricción que son endonucleasas que clivan (hidrolizan) en una forma específica puentes fosfodiéster 3' - 5' entre pares de bases adyacentes en la doble cadena de DNA.
La ligaza es una enzima que cataliza la formación de puentes fosfodiéster entre los extremos adyacentes 3' OH y 5' fosfato en el DNA. Para la actividad la enzima requiere Mg++ yuna unión covalente, derivada del ATP en el caso de la DNA ligasa del bacteriófago T4.

Luego viene la adicion de un plásmido que son pequeñas moléculas de DNA (de 5.000 pb aproximadamente) que se replican en forma autónoma en células bacterianas. Son círculos covalentemente cerrados de DNA de doble cadena. La mayoría de los plásmidos contienen genes resistentes a antibióticos, los que permitenel crecimiento de células bacterianas refugiando a los plásmidos bajo condiciones selectivas.
Una técnica de recombinación conocida como clonación consiste básicamente en:

1. Se corta el ADN circular del plásmido con enzimas de restricción, para generar extremos cohesivos.
2. Se corta el ADN que se quiere multiplicar. Asegurándose que los extremos del plásmido y los del ADN a insertar seancomplementarios y puedan unirse.
3. Se une el gen que se desea introducir (inserto) por medio de la enzima ADN-ligasa y luego se introduce el plásmido inserto en bacterias.
4. Se selecciona las bacterias que hayan introducido el plásmido con la ayuda de antibióticos. Dado que los plásmidos contienen un gen de resistencia a antibiótico, al exponer las bacterias a ese antibiótico, sólo las quehayan incorporado el plásmido (y con él la resistencia) sobrevivirán, mientras que las que no lo tengan morirán. Esta es una manera relativamente eficaz de obtener millones de copias del ADN incorporado. Dado que todas las copias del gen provienen de una sola molécula multiplicada a partir de una única bacteria que dio origen a la colonia, esta técnica lleva el nombre de clonación.

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