Guia Determin Metabolitos Practicas BQ Ciencias 2006 II

UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA
FACULTAD DE CIENCIAS Y FILOSOFIA
DEPARTAMENTO BIOQUIMICA, BIOLOGIA MOLECULAR Y FARMACOLOGIA
SECCION BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR

PRACTICAS DE LABORATORIO EN BIOQUIMICA– 2006 II


I.- DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE Y PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA

Azúcar en Sangre
La sangre es el vehículo por el cual la glucosa es distribuida a los tejidos yesta puede provenir de fuentes exógenas (realimentación) o de la reserva de carbohidratos. En un adulto sano con 75 Kg de peso, la reserva de glucosa es de aproximadamente 370 g y se encuentra almacenada en forma de glucógeno hepático y muscular. Cuando es requerido por el organismo, estas reservas pueden ser movilizadas y degradadas rápidamente, lo que permite una autonomía máxima de 4 a 8 horasdependiendo de la actividad realizada, es por ello que el ser humano es altamente dependiente de la ingestión de carbohidratos de forma periódica.

Monitorizar los niveles de glucosa como índice de los estados extremos fisiológicos que ocurren entre el ayuno y la realimentación no es posible, debido a que existen mecanismos de homeostasis finamente regulados que, en condiciones de ayuno, permitenmantener niveles de glucosa en sangre entre 3.6 y 6 mmoles/L (65 y 108 mg/dl), gracias a la degradación de glucógeno inicialmente y de aminoácidos glucogénicos posteriormente. Además, los niveles de glucosa son afectados por el ejercicio y por la presencia de muchas enfermedades, la edad, uso de drogas, factores de stress, etc.

Sin embargo, después de corregir los niveles de glucosa en ayunaspor los factores edad e interacción de drogas, se puede determinar enfermedades relacionadas con el control de los niveles de glucosa circulante, los cuales tienen gran importancia diagnóstica. Diabetes y problemas hepáticos pueden ser detectados haciendo mediciones de glucosa en ayunas y realizando a su vez una prueba de tolerancia a la glucosa

Métodos para medir glucosa:

El primer método quese utilizó para determinar glucosa es el denominado sustancias reductoras en sangre total, que utilizaba la reducción del cobre por la glucosa, para obtener un compuesto coloreado. Ese método es histórico, y ya no se utiliza en la práctica clínica.

paso 1: paso 2:

Cu ++ + glucosa  Cu2OCu+ + molibdato  complejos de molibdeno (azul)
calor
OH-

Este método da unsesgo positivo grande, porque la reacción puede darse no sólo con glucosa sino con otros azúcares, creatinina, ácido ascórbico y otros compuestos reductores que puedan estar presentes en la sangre.
Sin embargo, el sesgo positivo de este método era reducido en parte porque la medición se hacía en sangre total. Aunque la concentración de glucosa es usualmente la misma en el agua del plasma y enel agua dentro del eritrocito, existe relativamente menos agua por volumen de eritrocito que en el plasma. En general, los rangos de referencia para la glucosa son menores cuando se expresan para sangre total que para plasma.

La tendencia en los últimos años ha sido usar ensayos enzimáticos para medir glucosa, indistintamente en suero o en plasma. Si bien los rangos de referencia para esosmétodos no son muy diferentes, existe una convención para diferenciar los métodos enzimáticos del de sustancias reductoras, y es denominar “azúcar” al resultado del primer método y “glucosa” a los del segundo. La determinación de glucosa en plasma se considera más representativa de la concentración de ésta en fluidos corporales y por ello se prefiere a la determinación en sangre total.
El método quese va a utilizar en la práctica utiliza a la enzima glucosa oxidasa, produciendo acido D-glucónico y peróxido. El peróxido reacciona con el ácido p-hidroxibenzoico (p-HBA) y la 4-aminoantipirina (4-AAP) formando un compuesto coloreado, el cual es cuantificado por espectrofotometría a 505 nm. La glucosa oxidasa es altamente específica para la ß-D-glucosa.


D-glucosa + O2...