Ingenieria




Universidad Agraria de Colombia
Ingeniería Agroindustrial y De Alimentos
Laboratorio de Química Orgánica
Cromatografía En Capa Delgada
Identificación De Colorantes En Alimentos




1. Objetivo

Identificar las clases de pigmento de las sustancias problemas y su pureza, por medio de la cromatografía de capa fina.
Objetivos Específicos:
Conocer la técnica de cromatografía encapa fina, c.c.f., sus características y los factores que en ella intervienen.
Calcular valores de r.f. de varias sustancias.
Deducir, a través del r.f., la relación que existe entre la polaridad de las sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
Aplicar la técnica de c.c.f. como criterio de pureza de las sustancias.
Aplicar la técnica de c.c.f. como criterio parcial deidentificación de sustancias

2. Competencias a desarrollar

Familiarizar al estudiante con la cromatografía en capa delgada como una técnica de laboratorio que les sirva de herramienta para la separación e identificación de compuesto orgánico. Al finalizar la práctica el alumno debe tener los conocimientos básicos que le permitan seleccionar la técnica cromatográficas adecuada para separarcompuestos orgánicos de distinta naturaleza y su aplicación en la industria de alimentos.

3. Antecedentes

Cromatografía: es un método de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación, en todas las ramas de la ciencia. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla,permitiendo identificar y determinar compuestos.
Tipos de cromatografía en columna:
cromatografía de filtración en gel
La cromatografía de filtración en gel se realiza empleando unas matrices formadas por unas esferas porosas. El volumen de los poros es muy elevado y su diámetro está determinado. Cuando penetran en el lecho de la columna dos proteínas de tamaños tales que una penetra en los poros delas bolas de gel y la otra no, la primera se reparte entre el espacio entre las bolas y el interior de los poros, reduciéndose la concentración en la fase libre entre las bolas. La segunda proteína, por tamaño, sólo puede encontrarse entre las bolas. El flujo de solvente es más elevado entre las bolas que en el interior de los poros de éstas, por lo que el efecto neto es el de acelerar eldesplazamiento de las proteínas de mayor peso molecular respecto al de las de menor peso molecular. En esta cromatografía se eluyen primero las proteínas mayores, y en segundo lugar las menores, y tiene una gran influencia en el resultado la longitud de la columna y el volumen de la misma. Columnas largas aseguran separaciones de mayor calidad.  Empleando patrones de proteínas de peso molecular conocidose emplea para determinar el peso molecular de proteínas de tamaño desconocido.
 

cromatografía de afinidad y de inmunoafinidad
En la cromatografía de afinidad las bolas de gel que conforman el lecho de la columna presentan unido en su superficie un ligando, una molécula ante la que tiene afinidad una o más de las proteínas presentes en la mezcla a separar. Al atravesar la columna el ligandosecuestra sobre la superficie de las bolas de gel la proteína afín, y deja pasar el resto. La elución de la proteína afín se puede conseguir modificando las propiedades de carga del ligando (variando el pH hasta alcanzar su punto isoléctrico, variando la fuerza iónica del solvente, etc...) con lo que se reduce la intensidad de la interacción hasta anularla.
La naturaleza del ligando es muyvariada, puede ser un receptor (proteína) unido a las bolas, que seleccionará su/s ligando/s de una mezcla compleja, o el antígeno empleado en una inmunización el que recubre las bolas o en el caso concreto de la inmunoafinidad el ligando que recubre las bolas son anticuerpos que retienen en la columna a aquellas proteínas que contienen los epítopos que reconocen.
En ocasiones la cromatografía de...