manual de microbiologia

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS AGRÍCOLAS
CARRERA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA

MANUAL DE PRÁCTICAS DE
MICROBIOLOGÍA

PERIODO:
Septiembre 2013 – Febrero 2014
DOCENTE:
Ing. Clara Iza
AYUDANTES: Sr. Rodrigo Coello
Sr. Darío Trujillo

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CONTENIDO
1.

ESTERILIZACIÓN DE INSTRUMENTOS Y MEDIOS DE CULTIVO ..................................................... 3

2.El pH Y USO DEL POTENCIÓMETRO ............................................................................................. 8

3.

USO Y PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO ......................................................................... 12

4.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE LA BACTERIA Rhizobium spp. ......................................... 17

5.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARAIDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS ............................................... 23

6.

INOCULACIÓN DE BACTERIAS PROMOTORAS DE CRECIMIENTO EN SEMILLAS ........................ 29

7.

AISLAMIENTO DE Azotobacter sp.............................................................................................. 34

8.

AISLAMIENTO DE PSEUDOMONAS A PARTIR DE SUELO........................................................... 38

9.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE Azospirillum spp. ............................................................ 42

10.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE NEMATODOS .............................................................. 46

11.

HONGOS MICORRÍCICOS ARBUSCULARES (HMA) ................................................................. 52

12.AISLAMIENTO DE Trichoderma spp COMO ANTAGONISTA DE HONGOS FITOPATÓGENOS. 56

13.

ANÁLISIS DE GRUPOS FUNCIONALES DE MICOORGANISMOS EN EL SUELO ........................ 62

14.

AISLAMIENTO DE HONGOS FITOPATÓGENOS ...................................................................... 66

15.

ANEXOS................................................................................................................................. 68

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1. ESTERILIZACIÓN DE INSTRUMENTOS Y MEDIOS DE CULTIVO
La esterilización implica la destrucción de toda forma de vida microbiana incluyendo las
esporas.
Se consigue por medio de procesos físicos (calor, radiación, filtración) o químicos. El
vapor saturado, el calor seco, el gas de óxido de etileno y algunos agentes químicos
líquidos sonlos principales agentes esterilizantes usados.
1.1. Desinfestación
Es necesario no confundir los términos esterilización y desinfestación, esta última significa
una destrucción parcial de los microorganismos o solamente la inhibición de los mismos.
1.2. Esterilización por calor húmedo (en el autoclave)
El calor saturado con alta presión es el método más sencillo, económico y práctico paraesterilizar
El vapor actúa como transportador de calor el mismo que se deposita en los objetos por
medio de condensación.
El calor húmedo es más eficiente que el calor seco porque el vapor produce la
coagulación e hidrólisis de las proteínas de los microorganismos.

Figura 1. Partes de un autoclave vertical.
Descripción de las partes de un autoclave:
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Manómetro: mide la presión, ytemperatura en el interior del autoclave.

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Válvula de desfogue: con esta se puede eliminar vapor del interior de la cámara,
consiguiendo bajar la temperatura.
Perillas de seguridad: sirven para sujetar firmemente la tapa.
Marca de seguridad: es una flecha, al coincidirla con una marca en el autoclave, la
tapa encaja y ya no se mueve.
Canastilla: en esta se colocan losmateriales a autoclavar.

Con una presión de 15 PSI (medida de presión: libras por pulgada cuadrada por sus
siglas en inglés) internamente la temperatura llega a 121.16oC, esta temperatura equivale
a una atmosfera de presión; con esta temperatura y presión mueren los microorganismos.
Los tiempos de esterilización dependen de los materiales y volúmenes a esterilizar:
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Tubos de ensayo y...