Metodo MBA B12

4. Vitamina B12
Los compuestos activos de la vitamina B12 presentan una estructura química complicada; el más conocido e importante es cianocobalamina. La vitamina B12 se encuentra sólo en materialde origen animal y en los metabolitos de microorganismos. Las fuentes importantes de B12 son el hígado, riñón y yema de huevo.
a) Fórmula y propiedades
Fórmula empírica
Vitamina B12: C63H88O14N14PCo(P.M.  1355,4).
Descripción
Polvo cristalino rojo oscuro.
Punto de fusión
210-220°C carbonización.
Espectro de absorción
La solución acuosa muestra una absorción máxima a 278, 361 y 550 nm.Estabilidad
La cianocobalamina cristalina y sus soluciones neutras o débilmente ácidas son relativamente estables al aire y calor pero son atacadas por la luz y la radiación UV. La vitamina B12 es sólo levementeestable a álcalis, ácidos fuertes y agentes reductores.
b) Método (19)
El nivel presente en los alimentos es muy bajo y el método microbiológico es la única manera de estimar la vitamina B12 en formasatisfactoria.
Extracción
La vitamina B12 es extraida de la muestra con agua o buffer a una temperatura de aproximadamente 100°C durante 10-30 minutos con la adición de cianuro de potasio. El pH delextracto se ajusta a 6 ya sea con hidróxido de potasio o ácido clorhídrico. La dilución del extracto se realiza con agua para obtener concentraciones de aproximadamente 2 mg/ml.
Microorganismos deensayo y método
El microorganismo de ensayo, Lactobacillus leichmanii (ATCC 7830) es mantenido en un agar de cultivo de Micro-Ensayo (Laboratorios Difco, Detroit USA; no. 031902). El subcultivo espreparado por incubación hasta 16-18 h a 37°C en el medio de fermentación que contiene B12(caldo de micro inoculación (Difco no. 0320-02). El medio de cultivo Difco no. 0457-15 se utiliza para esta prueba.Los tubos se llenan con el medio (10 ml), y se agrega 25, 50 y 100 μl del extracto o solución estándar. Seis tubos para blanco no contienen ningún aditivo. Los tubos son sometidos a un baño de vapor...