METODOS DE SEPARACION E IDENTIFICACI N DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS

METODOS DE SEPARACION E IDENTIFICACIÓN DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS.
En ocasiones nos encontramos con una serie de mezclas que se tienen que separar para ser objetos de investigación y dado que los componentes de cada mezcla, suelen ser muy parecidos entre sí, se utilizan métodos y técnicas especializadas en separarlos, como lo es la cromatografía.
Aunque hay muchas y variadas técnicascromatografías, el objetivo de todas es separar las sustancias que forman una mezcla y enviarlas secuencialmente a un detector para que las determine y cuantifique.
 FASES.
Las cromatografías se hacen en dos fases. Una estática y otra móvil. En la fase estática o estacionaria, la mezcla se coloca sobre un soporte fijo. En la fase móvil se hace mover otra sustancia sobre la mezcla que ya está sobre elsoporte de la fase estática, por ejemplo un líquido que se mueve por el papel con la mezcla. En la fase móvil empezará el proceso de separación de los componentes de la mezcla al moverse a distintas velocidades por el líquido los distintos componentes de la mezcla sobre el papel.
Tipos

Todas se basan en el mismo fenómeno: permitir que las sustancias que forman una mezcla entren en contacto con dosfases (un líquido y un gas, un sólido y un líquido, etc.). Una de las fases es estática (no se mueve) y tenderá a retener las sustancias en mayor o menor grado; la otra, fase móvil, tenderá a arrastrarlas. Cada sustancia química tiene distinta tendencia a ser retenida y a ser arrastrada.
Dependiendo de la naturaleza de la fase estática y de la fase móvil se pueden distinguir distintos tipos decromatografía.
a) Cromatografía sólido-líquido. La fase estática o estacionaria es un sólido y la móvil un líquido.
b) Cromatografía líquido-líquido. La fase estática o estacionaria es un líquido anclado a un soporte sólido.
c) Cromatografía líquido-gas. La fase estática o estacionaria es un líquido no volátil impregnado en un sólido y la fase móvil es un gas.
d) Cromatografía sólido-gas. La faseestacionaria es un sólido y la móvil un gas.




Según el tipo de interacción que se establece entre los componentes de la mezcla y la fase móvil y estacionaria podemos distinguir entre.
a) Cromatografía de adsorción. La fase estacionaria es un sólido polar capaz de adsorber a los componentes de la mezcla mediante interacciones de tipo polar.
b) Cromatografía de partición. La separación se basa en lasdiferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y móvil, que son ambas líquidas.
   
c) Cromatografía de intercambio iónico. La fase estacionaria es un sólido que lleva anclados grupos funcionales ionizables cuya carga se puede intercambiar por aquellos iones presentes en la fase móvil.
Cromatografía de capa fina: basa en el principio del reparto entre dosfases.  En general, una cromatografía se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea separar (muestra) interaccione con un medio que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio  la fase móvil que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para eluír a las moléculas en la muestra. Debido a que las distintas moléculas en la muestra presentan diferentecoeficiente, la fase móvil a los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que en la fase móvil serán eluídos más rápido que los que sean preferencialmente solubles en la fase estacionaria.
Cromatografía de columna: Los elementos básicos en la cromatografía de columna son una son la fase estacionaria y la fase móvil. La fase estacionaria la forma un sólido poroso, el cualqueda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada en plástico o vidrió.
La fase móvil se encuentra formada por la solución que lentamente va atravesando la fase estacionaria. La solución que sale al final de la columna se reemplaza constantemente por nueva solución que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna.
La Cromatografía en columna se emplea...