Microbiologia

ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO



FACULTAD DE CIENCIAS


ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA















LABORATORIO DE BIOQUÍMICA



TEMA: CROMATOGRAFÍA EN PAPEL ASCENDENTE DE CARBOHIDRATOS


PRACTICA DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

TEMA: Cromatografía en Papel ascendente de carbohidratos

OBJETIVOS:

GENERAL:

• Mostrar cómo se separanpor cromatografía los componentes de una mezcla de compuestos.

ESPECÍFICOS:

• Identificar el por qué los distintos azucares migran en forma distinta en una cromatografía en papel.

• Ilustrar la técnica de la cromatografía ascendente.



MARCO TEÓRICO

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizaranálisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica potente no requiere de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la disolución y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. La separación se realiza enfunción de la afinidad de los solutos con las dos fases, las más solubles en agua se quedarán cerca del punto donde se aplicó la muestra, y las menos solubles en agua y más solubles en el disolvente llegarán más lejos. Las sustancias separadas se identifican mediante diversos procedimientos físicos o químicos
La cromatografía en papel es una técnica utilizada para análisis inorgánico cualitativo,permite llevar a cabo la separación e identificación de iones, trabajando con cantidades mínimas de sustancia. Pertenece al tipo de “Cromatografía de partición” se fundamenta en que las sustancias problema, pueden tener diferentes coeficientes de reparto en dos disolventes de inmiscibilidad limitada, uno permanece fijo en la superficie del papel “fase estacionaria” generalmente en agua, la fase móvilconstituida generalmente por una mezcla de disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay varios tipos de cromatografía, la ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel invertido), radial y de separación de zonas y sectores.
MATERIALES:

• 1 CUBA DE VIDRIO

• PAPEL whatman No 1 de 10x20.

• Capilares de vidrio

• Vaso de precipitación de 100ml.

• 1 Pipetagraduada 5ml

• 1 Pipeta 1ml



REACTIVOS:


• Estándares de carbohidratos.

• Solvente: butanol-piridina-agua(60:40:30v/v).

• Revelador: nitrato de plata en acetona 2%

• KOH al 5% en etanol

• Solución de amoniaco al 3%

• Tiosulfato de sodio al 3%


PROCEDIMIENTO:

1. Colocar 50ml de disolvente elegido en el fondo de la cubetacromatográfica y tapar.

2. Preparar una hoja de papel whatman # 1 de 10x20cm

3. Trazar el papel de cromatografía ( con un lápiz) una línea horizontal a 3 cm del margen inferior, con cuatro orígenes

4. En cada origen aplicar 1 o 2 gotas de la muestra a examinar (estándares) utilizando un capilar o una micropipeta.

5. Secar el papel a la temperatura ambiente

6.Suspender el papel en el soporte y colocar en la cuba, de modo que la línea de aplicación quede un poco más arriba del solvente

7. Cerrar la cuba y correr el solvente hasta que llegue a 3 cm del margen superior

8. Secar el cromatograma y marcar la línea de llegada del solvente

9. Secar el cromatograma(en la sorbona)

Revelado del cromatograma

a) Sumergir elpapel cromatograma en una solución de nitrato de plata en acetona y dejar secar al aire

b) sumergir el papel en una solución de KOH al 5% en etanol hasta que aparezcan las manchas y lavar con agua

c) posteriormente sumergir el papel en una solución de amoníaco al 3% y lavar con agua

d) por último sumergir el papel en una solución de Tiosulfato de sodio al 3% y...