Morfologia Colonial

LABORATORIO Nº 4.
AISLAMIENTO Y MORFOLOGÍA COLONIAL

OBJETIVOS:
1. Aislar dos microorganismos por la técnica de siembra de dilución por estría en placa de agar y obtener un cultivo axénico o puro.
2. Describir las diferentes colonias obtenidas.
3. Hacer tinción de Gram de las colonias.

INTRODUCCIÓN.
El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza en lamayoría de los casos, mediante la producción de colonias aisladas en cultivos sólidos. El crecimiento explosivo de las bacterias permite producir un gran número de ellas a partir de una única célula inicial de forma que, tras un periodo de incubación en las condiciones ambientales adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por individuos iguales (un clon bacteriano).
Sedenomina cultivo puro (axénico) al que contiene sólo un tipo de microorganismos. Los cultivos puros se inician a partir de colonias aisladas, de manera que todos los individuos del mismo tengan la misma composición genética. Los cultivos puros son esenciales para poder estudiar las características de los microorganismos y para poder identificarlos con seguridad.
Las colonias de cada especiebacteriana son diferentes ya sea en tamaño, color, consistencia, etc., y pueden ser diferenciadas sobre estas bases. Cada colonia aislada está constituida de un solo tipo de bacterias, ya que se supone que es la descendencia de una sola célila y por tanto, un cultivo puro.
Para estudiar las características físicas, químicas, fisiológicas, etc., de una bacteria, se necesita que ésta sea aislada encultivo puro y el aislamiento en plato Petri es el primer paso para ello, siendo el segundo paso la siembra de una porción de una colonia en un medio de cultivo en tubo, verificando su pureza después de la incubación apropiada, mediante la observación al microscopio.
La morfología de las colonias es importante por lo anteriormente expuesto y debe familiarizarse el alumno con ella. La terminologíamencionada a continuación sobre algunas de las características más constantes de una colonia bacteriana es muy útil:
FORMA: Putiforme, circular, irregular, alargada, fusiforme, filamentosa, rizoide, etc.
TAMAÑO: Estimar el diámetro en mm
SUPERFICIE: Lisa, rugosa, cerebriforme, en anillos concéntricos, etc.
ELEVACION: Aplanada, elevada, pulvinada, convexa, umbonada, umblicada, etc.
BORDE:continuo, ondulado, lobulado, erosionado, festoneado, filamentoso, etc.
ESTRUCTURA INTERNA: Amorfa o granulosa.
COLOR: Según sea observado por la luz reflejada o por la luz transmitida, puede ser de color blanco, amarillo, rojo ladrillo, anaranjado, etc.
OPACIDAD: Transparente, opaca, etc.
CONSISTENCIA: Dura, viscosa, membranosa., gelatinosa, mucosa, etc. Usar el asa bacteriológica para determinar laconsistencia.

MATERIALES:
1. Caja de Petri conteniendo agar nutritivo estéril.
2. Tubos de ensayo conteniendo agar inclinado.
3. Tubos de ensayo conteniendo cultivo mixto.
4. Lápiz graso.
5. Asa bacteriológica.
6. Mechero Bunsen.
7. Cerillos o encendedor.
8. Gradilla.

PROCEDIMIENTO
1. Con el lápiz graso dividir la caja de Petri en 3 sectores, de tal maneraque al destaparla para proceder a la inoculación, se tenga como se indica en la figura:




El sector no. 1 es más pequeño y sirve para descargar el asa.
2. Usando la técnica ya conocida, tomar el cultivo bacteriano y en condiciones asépticas obtener una asada del material.
3. Una vez cerrado el tubo, colocarlo en una gradilla.
4. Con la mano izquierda levantar parcialmente la tapa dela caja Petri y descargar el material en el sector 1, trazando una serie de zig-zags muy cerrados a todo lo ancho del sector. Cerrar la caja.
5. Esterilizar el asa flameándola y mientras que se enfría, girar la caja 90° hasta que el sector 1 quede a la izquierda y el 2 arriba a la derecha.
6. Trazar unos 5 zig-zags en el sector 2 invadiendo el sector 1 para llevar un poco de material al...