Pr Ctica 6 Amino Cidos Prote Nas

Hernández Barrera Daniel Bernardo
Mulato Jiménez Isaac
2QV1
Práctica 6: Hidrólisis de una proteína y ensayos para proteínas y aminoácidos
Objetivo
Llevar a cabo la hidrólisis de una proteína, para identificar diferentes tipos de aminoácidos a partir de sus propiedades fisicoquímicas y de una cromatografía en placa fina.
Introducción
Los péptidos y las proteínas son polímeros de los aminoácidosenlazados por enlaces amida (peptídicos). Las unidades repetidas son llamadas residuos de aminoácidos. Las proteínas son polipéptidos de 40 a 4000 residuos de aminoácidos. Según su función, las proteínas se clasifican en:
Proteínas estructurales: Insolubles en agua, gran resistencia, en forma de fibras. Constituyen piel, músculos, cabellos.
Proteínas globulares: Proteínas pequeñas que se asocianformando unidades compactas, solubles en agua. Desempeñan funciones variadas en el organismo, como enzimas, hormonas, anticuerpos, entre otros.
Proteínas conjugadas: Asociadas a una parte no proteica, nucleoproteínas, glicoproteínas, lipoproteínas.
De acuerdo a su estructura, las proteínas se clasifican en:
Primaria: Secuencia específica de aminoácidos en la cadena, formada únicamente por enlacespeptídicos.
Secundaria: Forma influenciada por interacciones de puente de hidrógeno, las 2 estructuras posibles son α-hélice y hoja plegada-β.
Terciaria: Estructura influenciada por puentes de hidrógeno, puentes de disulfuro, fuerzas electrostáticas, determinando la conformación de las proteínas.
Cuaternaria: Resultado de la agrupación de 2 o más unidades plegadas.
Las proteínas se pueden hidrolizarde 3 maneras distintas:
Hidrólisis ácida: Se basa en la ebullición prolongada de la proteína con soluciones ácidas fuertes. Este método destruye completamente el triptófano y parte de la serina y treonina.
Hidrólisis básica: Preserva los aminoácidos destruidos por la hidrólisis básica, pero fácilmente forma mezclas racémicas.
Hidrólisis enzimática: Se utilizan enzimas proteolíticas cuya actividades lenta y a menudo incompleta, sin embargo no se produce racemización, y no se destruyen los aminoácidos, lo que la hace muy específica.
Los aminoácidos en solución acuosa existen en forma de ión bipolar, por lo que reaccionan con ácidos y bases.







Fundamento
Los aminoácidos, al poseer grupos de ácido carboxílico y aminas, pueden ser identificados de distintas maneras aprovechando lo antesmencionado. Esto se lleva a cabo con pruebas como técnicas cromatográficas, reacciones específicas que pongan de manifiesto la presencia de grupos característicos en los aminoácidos. Entre estas pruebas se pueden mencionar la reacción xantoproteica, en la cual se lleva a cabo una reacción de sustitución electrofílica aromática con el anillo aromático de la tirosina, fenilalanina y el triptófano.La reacción del ácido nitroso, que sirve para evidenciar la presencia de grupos amino en aminoácidos, y amino terminales en proteínas/péptidos.
La reacción de precipitación con acetato de plomo (II), la que al reaccionar con un grupo funcional sulfhidril (cisteína), forma sulfuro de plomo (II) al reaccionar con el enlace.
La reacción con ninhidrina, que sirve para comprobar la presencia de gruposamino libres, lo que indica una mezcla de aminoácidos.
La reacción de Biuret, que es útil para evidenciar la presencia de péptidos y proteínas, al formar un complejo colorido con el CuSO4 (azul intenso).
Al poder los aminoácidos comportarse como ácidos o bases (dependiendo del pH), también se puede poner a prueba su capacidad como buffer de una solución con ácidos fuertes y bases fuertes, y susindicadores de pH al rango correspondiente.
Resultados
I. Reacción xantoproteica:

II. Reacción de precipitación
III. Reacción de Biuret












IV. Reacción con ninhidrina




V. Reacción con ácido nitroso

Acción reguladora de aminoácidos

Solución
Indicador
Color inicial
mL HCl 0.1N
Color final
Agua destilada
Rojo Congo
Rojo
0.2
Negro
Solución B
Rojo Congo
Rojo
0.3
Negro



mL NaOH 0.1N...