Uso de probióticos como método de control de Vibrio harveyi



Uso de probióticos como método de control de Vibrio harveyi

Departamento de Microbiología. Facultad de Ciencias. Universidad de Málaga, Campus de teatinos. E-29071, España

Vibrio harveyi fue aislado de un pez perteneciente a la especie de Solea senegalensis, una especie en auge en la acuicultura y que se ha visto comprometida por diversos factores bióticos para su crecimiento, comopuede ser la infección por esta bacteria. Este estudio se centra en demostrar qué probióticos podrían inhibir el crecimiento del patógeno y evitar así la muerte de los especímenes de Solea senegalensis evitando el impacto económico que supone la infección de estos especímenes al tener que ser sacrificados en el caso de ser infectados.

Palabras clave: Vibrio harveyi, probióticos, crecimiento,respuesta inmune, bacteriocinas, Solea senegalensis.

Introducción

Solea senegalensis es una especie de pez perteneciente a la familia Soleidae y se ha convertido en una especie de interés para el desarrollo de la acuicultura. Desde su descubrimiento en costas ibéricas (Cárdenas, 1977) la investigación sobre su distribución, morfología larvaria y cultivo ha aumentado considerablemente en losúltimos años, la producción industrial no ha terminado de despegar por una parte por el tiempo que se lleva trabajando sobre la misma, y por otra la demanda existente de esta especie en el mercado, su elevado precio y una dificultad técnica no excesivamente compleja. Actualmente basándose en estudios y trabajos realizados por distintos centros y grupos de investigación tanto nacionales como foráneosreferidos a esta especie, el CETGA (Clúster de Acuicultura de Galicia) ha llegado a crear y poner en marcha una tecnología de recirculación para producción de Solea senegalensis que a día de hoy comienza a aplicarse, lo que ha permitido hacer de esta producción, en la actualidad, una actividad industrial rentable. En contraposición con estos nuevos métodos de cría se ha visto una limitación en elavance del engorde de los lenguados por su excesiva incidencia de patologías oportunistas (Cañavate, 2005). Para nuestro estudio se obtuvo un lenguado (Solea senegalensis) que provenía de un tanque donde se habían dado muertes de Solea senegalensis y de uno de éstos se pudo obtener muestras de Vibrio harveyi, un patógeno tanto primario como oportunista, del género Vibrio que, en Solea senegalensis,produce ulceraciones de la piel y llegan a matar al espécimen.
El objeto de nuestro estudio es testar la capacidad de los probióticos para evitar la infección por Vibrio harveyi .Los probióticos son en nuestro caso bacterias que inhiben el crecimiento del patógeno porque compite por los nutrientes con la bacteria patógena, porque crea respuesta inmune o bien por su capacidad antagonista debido ala liberación de sustancias denominadas bacteriocinas.

Material y métodos

La técnica que se utilizó fue la siembra en pocillos. En primer lugar se puso a crecer nuestra bacteria patógena Vibrio harveyi, aislada previamente de un espécimen infectado, en un medio líquido (TBS) durante 24h. Se ajusta la turbidez a 0.5 McFarland, una medida aproximada que equivale a 108 UFC/ml.
A continuacióny con un hisopo estéril se sembró en placas de TSA salino, con un total de 3 pases con el objetivo de cubrir toda la placa, siembra en césped.
Las cepas probióticas se sembraron en caldo nutritivo y se dejaron los días necesarios para su crecimiento.
Una vez crecidas las bacterias potencialmente probióticas, se procedió de la siguiente manera: Lo primero fue, con una pipeta Pasteur estéril, ycon la boca de la misma, elaborar una serie de pocillos, mediante incisiones, en los cuales se introdujo la bacteria probiótica. Si el probiótico produjera bacteriocinas, ésta difundiría por el agar y se observarían halos de inhibición, inhibición del crecimiento en este caso. Se incubó a 22ºC 24h.
En las mismas placas, además de hacer pocillos también se colocó una gota de entre 5 y 10 ul de...