2013 Lab 9 ELISA
Páginas: 5 (1218 palabras)
Publicado: 22 de septiembre de 2015
UNIVERSIDAD INTERAMERICANA DE PUERTO RICO
RECINTO DE ARECIBO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA
Biol 3405: Laboratorio de Inmunología
I. Título: ELISA
II. Objetivo:
Familiarizar al estudiante con la técnica de ELISA
Que el estudiante conozca algunas aplicaciones de la técnica
III. Introducción:
ELISA es una técnica basada en la detección de sustancias utilizando anticuerpos. Lassiglas significan ‘enzyme-linked immunosorbent assay’. Se pueden detectar antígenos, anticuerpos o cualquier proteína de interés utilizando anticuerpos conjugados a una enzima. Dependiendo del agente que se quiere detectar se utiliza un anticuerpo o dos anticuerpos.
Las pruebas de ELISA ofrecen una herramienta rápida y específica en el campo de la medicina y también la agricultura. Se utilizaen pruebas de embarazo, detección de enfermedades en personas, animales y plantas, detección de uso de drogas, pruebas de calidad de aire y determinación de pureza de alimentos. Recientemente uno de los retos que han tenido los centros de control de enfermedades (CDC) es el desarrollo de pruebas de ELISA que permitan detectar rápidamente el virus que causa el SARS (severe acute respiratorysyndrome).
La técnica de ELISA se puede utilizar para detectar anticuerpos en el suero de un paciente. Cuando una persona es expuesta a un agente infeccioso puede desarrollar anticuerpos en su contra. Utilizando ELISA se pueden detectar esos anticuerpos y determinar que la persona ha sido expuesta a ese agente y cuando. En ese caso ya que lo que se pretende detectar es un anticuerpo, solo se utiliza unanticuerpo para la detección.
Otra aplicación importante de ELISA es la detección de un antígeno particular como por ejemplo un virus o una bacteria. En ese caso se utiliza un anticuerpo primario que se enlaza al antígeno y un anticuerpo secundario el cual está conjugado con una enzima. El anticuerpo secundario se enlaza al primario. Luego se añade el sustrato de la enzima y se observa lareacción. La reacción usualmente genera un color.
Una enzima que se utiliza comúnmente como conjugado es la peroxidada de rábano (HRP: horseradish peroxidase) la cual en presencia de el sustrato TMB (tetramethylbenzidine) genera un color azul.
En el caso de pruebas de embarazo se utiliza ELISA para detectar la hormona gonadotropina coriónica humana (hCG). Esta hormona aparece en la sangre y orina de lamujer a varios días de la fertilización. La prueba consta de una tirilla cubierta con anticuerpos anti-hCG los cuales se marcan con un compuesto rosado. Cuando la tirilla se coloca en orina, si hay hCG, la misma se enlaza al anticuerpo y ese complejo migra por acción capilar. Cuando el complejo (anticuerpo, hCG y el compuesto rosado) llega al área de prueba donde se encuentra con un anti-hCG nomarcado se concentra. Esa concentración forma una marca rosada.
Se realizan diferentes tipos de ELISA:
Indirecto o directo: para el rastreo de anticuerpos o antígenos. Se utiliza un antígeno inmovilizado o un anticuerpo inmovilizado. En este ejemplo se ha inmobilizado un Ag y se añade suero del paciente para ver si tiene Ab’s contra el Ag. Luego se añade un Ab dirigido contra el primero queha sido marcado con una enzima. Se añade el sustrato y la enzima actúa sobre el mismo rompiéndolo y generando un producto con color. El color es indicativo de la presencia de Ab’s en el suero. Cada paso de este procedimiento requiere incubación y lavado.
En el segundo ejemplo se ha fijado un Ab y se busca la presencia de un Ag. Se añade un Ab marcado con una enzima que es específico para elAg. Se añade el sustrato y la enzima actúa sobre el mismo rompiéndolo y generando un producto con color. El color es indicativo de la presencia del Ag. Cada paso de este procedimiento requiere incubación y lavado.
En este ejercicio de laboratorio utilizaremos la técnica de ELISA para detectar la presencia de un Ag. El Ag en cuestión es globulina de ave.
IV. Materiales: (por...
UNIVERSIDAD INTERAMERICANA DE PUERTO RICO
RECINTO DE ARECIBO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA
Biol 3405: Laboratorio de Inmunología
I. Título: ELISA
II. Objetivo:
Familiarizar al estudiante con la técnica de ELISA
Que el estudiante conozca algunas aplicaciones de la técnica
III. Introducción:
ELISA es una técnica basada en la detección de sustancias utilizando anticuerpos. Lassiglas significan ‘enzyme-linked immunosorbent assay’. Se pueden detectar antígenos, anticuerpos o cualquier proteína de interés utilizando anticuerpos conjugados a una enzima. Dependiendo del agente que se quiere detectar se utiliza un anticuerpo o dos anticuerpos.
Las pruebas de ELISA ofrecen una herramienta rápida y específica en el campo de la medicina y también la agricultura. Se utilizaen pruebas de embarazo, detección de enfermedades en personas, animales y plantas, detección de uso de drogas, pruebas de calidad de aire y determinación de pureza de alimentos. Recientemente uno de los retos que han tenido los centros de control de enfermedades (CDC) es el desarrollo de pruebas de ELISA que permitan detectar rápidamente el virus que causa el SARS (severe acute respiratorysyndrome).
La técnica de ELISA se puede utilizar para detectar anticuerpos en el suero de un paciente. Cuando una persona es expuesta a un agente infeccioso puede desarrollar anticuerpos en su contra. Utilizando ELISA se pueden detectar esos anticuerpos y determinar que la persona ha sido expuesta a ese agente y cuando. En ese caso ya que lo que se pretende detectar es un anticuerpo, solo se utiliza unanticuerpo para la detección.
Otra aplicación importante de ELISA es la detección de un antígeno particular como por ejemplo un virus o una bacteria. En ese caso se utiliza un anticuerpo primario que se enlaza al antígeno y un anticuerpo secundario el cual está conjugado con una enzima. El anticuerpo secundario se enlaza al primario. Luego se añade el sustrato de la enzima y se observa lareacción. La reacción usualmente genera un color.
Una enzima que se utiliza comúnmente como conjugado es la peroxidada de rábano (HRP: horseradish peroxidase) la cual en presencia de el sustrato TMB (tetramethylbenzidine) genera un color azul.
En el caso de pruebas de embarazo se utiliza ELISA para detectar la hormona gonadotropina coriónica humana (hCG). Esta hormona aparece en la sangre y orina de lamujer a varios días de la fertilización. La prueba consta de una tirilla cubierta con anticuerpos anti-hCG los cuales se marcan con un compuesto rosado. Cuando la tirilla se coloca en orina, si hay hCG, la misma se enlaza al anticuerpo y ese complejo migra por acción capilar. Cuando el complejo (anticuerpo, hCG y el compuesto rosado) llega al área de prueba donde se encuentra con un anti-hCG nomarcado se concentra. Esa concentración forma una marca rosada.
Se realizan diferentes tipos de ELISA:
Indirecto o directo: para el rastreo de anticuerpos o antígenos. Se utiliza un antígeno inmovilizado o un anticuerpo inmovilizado. En este ejemplo se ha inmobilizado un Ag y se añade suero del paciente para ver si tiene Ab’s contra el Ag. Luego se añade un Ab dirigido contra el primero queha sido marcado con una enzima. Se añade el sustrato y la enzima actúa sobre el mismo rompiéndolo y generando un producto con color. El color es indicativo de la presencia de Ab’s en el suero. Cada paso de este procedimiento requiere incubación y lavado.
En el segundo ejemplo se ha fijado un Ab y se busca la presencia de un Ag. Se añade un Ab marcado con una enzima que es específico para elAg. Se añade el sustrato y la enzima actúa sobre el mismo rompiéndolo y generando un producto con color. El color es indicativo de la presencia del Ag. Cada paso de este procedimiento requiere incubación y lavado.
En este ejercicio de laboratorio utilizaremos la técnica de ELISA para detectar la presencia de un Ag. El Ag en cuestión es globulina de ave.
IV. Materiales: (por...
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