3. ASEPSIA Y UBICUIDAD MICROBIANA

1. INTRODUCCIÓN

Los microorganismos como otros seres vivos, son susceptibles a los cambios de condiciones ambientales y en la medida en que se han podido adaptar a estos cambios, se han distribuido en una gran diversidad de hábitats incluyendo los de condiciones extremas sobre todo de tipo físico y químico.

Por lo tanto, para limitar su presencia o eliminarlos, y de esta manera poderdesempeñar correctamente las tareas en un laboratorio de microbiología, es indispensable contar con conocimientos teóricos acerca de los diferentes métodos de control del crecimiento microbiano (métodos de esterilización, desinfección, asepsia, etc.); y con un buen manejo práctico de los equipos destinados a tal fin, así como también del flameado de cajas de Petri, tubos y esterilización de asas a lallama del mechero.

2. OBJETIVOS
Observar la importancia de la asepsia en el control de la contaminación microbiana en el laboratorio
Demostrar la ubicuidad de los microorganismos a partir de diversas fuentes utilizando técnicas de cultivo en medio sólido.

3. CONSULTAS PRELIMINARES

Se recomienda leer un texto de microbiología general sobre la distribución de los microorganismos endiferentes ambientes y conceptos de técnicas de asepsia.

4. MATERIALES

Los materiales requeridos por grupo son:

MATERIAL
CANTIDAD
Cajas de Petri
6
Copos de algodón
6
Asa bacteriológica
1
Mechero
1
Tubos taparosca (2 agua, 1 sln salina)
3

5. REACTIVOS

SUSTANCIAS*
CANTIDAD
Agar nutritivo
90 ml (15 x c/c)
Solución salina fisiológica
10 mL
Hipoclorito de Na (5,25%, 2,5%,0,5%)

Agua destilada estéril
20mL
Cultivo bacteriano en caldo
1

No hay restricción de seguridad por el uso de este medio de cultivo. Remitirse al protocolo de preparación recomendado por el proveedor en el frasco del medio de cultivo.

6. EQUIPOS

EQUIPOS*
CANTIDAD
Incubadora
1 para todos los grupos

La incubadora estará previamente calibrada a la temperatura requerida, lo cualserá realizado por el auxiliar de laboratorio. Favor no manipular el equipo y mantenerlo cerrado. Abrir solamente para incluir el cultivo a incubar.

7. PROCEDIMIENTO

7.1. TÉCNICAS ASÉPTICAS

a) Con un asa sin esterilizar tomar una gota de agua destilada estéril y rayar suavemente la superficie del agar nutritivo, como lo muestra la gráfica, teniendo la precaución de no romper la superficiedel medio de cultivo

b) Limpiar la superficie de la mesa con alcohol al 70%, encender el mechero y quemar el asa bacteriológica hasta que se torne roja y dejarla enfriar. Al lado del mechero, destapar cuidadosamente otro tubo de agua destilada estéril y con el asa tomar una gota, rayar suavemente la superficie del medio de cultivo

c) Una vez realice la siembra, vuelva a quemar el asa paradesinfectarla. Flamee la boca del tubo de ensayo para evitar contaminación. Repita el procedimiento anterior, pero coloque la gota a partir del tubo que contiene un cultivo bacteriano. En todos los casos, evite la manipulación libre del asa bacteriológica y flaméela hasta lograr la esterilización.

Rotule cada una de las cajas y séllelas con papel parafilm o similar. Colóquelas en forma invertidaen la incubadora a 35 +/- 2 °C por un periodo de 24 horas.






7.2. DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN AMBIENTES NATURALES

7.2.1. MICROORGANISMOS DEL AIRE

Destapar una caja de petri con agar nutritivo en. 1. Sobre la incubadora, 2. En pasillo, 3. En el baño, 4. Dentro de la cámara de flujo laminar apagada, 5. Dentro de la cámara de flujo laminar encendida (realizar el procedimientode desinfección previo al uso de la cámara) y 6. Al lado del mechero encendido
Dejarla expuesta por 15 minutos, después tapar adecuadamente y rotular
Incubar a 35 ± 2 ªC durante 24 a 48 horas, colocando las cajas invertidas.

Los muestreos descritos en los siguientes ítems deben realizarse teniendo en cuenta las técnicas de asepsia

7.2.2. MICROORGANISMOS EN SUPERFICIES

Tomar una...