Actividad Enzimática

Miércoles 26 de Octubre del 2012, Bayamón PR
Introducción
La catalasa es una enzima presente en los peroxisomas de las células de todos los tejidos animales y vegetales. Actúa sobre el peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) descomponiéndolo en agua y oxígeno, y liberando energía en forma de calor. El agua oxigenada es el producto resultante de las reacciones metabólicas y si no sedestruye puede ser tóxica para la célula. Si se pone un tejido en contacto con el agua oxigenada se observa la aparición de efervescencia
(Burbuja en el tubo) esto es por la producción de oxígeno. Las enzimas funcionan bajo condiciones específicas y controladas. Para poder observar esos cambios utilizaremos alta y baja temperatura que varían desde 0°C- 100°C. Entonces los productos resultantes deesos cambio en temperatura son llamado Foam que es la cantidad de solución obtenida en mililitro entre la reacción de la actividad enzimática, hay reaccionar con el cambio en PH y los cambio en temperatura.

Actividad Enzimática
Objetivos:
a) Explicar lo que es una enzima, su función y los componentes moleculares.
b) Explicar el rol del sitio activo en la especificidad y actividadde una enzima.
c) Distinguir el sustrato, la enzima y el producto de la catalasa.
d) Evaluar los efectos que tienen la temperatura, el pH y la concentración de los sustratos y enzimas en la actividad enzimática.
Materiales:
a. 1 Bandeja de disección
b. 1 Bisturí
c. 1 Ostericer
d. 1 pedazo de Hígado (carne de ternera)
e. Agua destilada
f. 1 Balanza
g.1 Cristales de reloj grande
h. 1 Mortero
i. 12 tubos de ensayo
j. 1 micropipeta de 1000 ul
k. 1 caja puntas 1000
l. 1 timer
m. 1 vaso de 250 ml
n. 1 vaso de 100ml
o. 2 Pipetas Pasteur estériles
p. 1 termómetro
q. 1 baño de agua a 37°C
r. 1 plancha para calentar
s. Hielo
t. 1 envase para hielo
u. 30 ml de Peróxido
v. 5ml debuffer de fosfato 0.1 M, pH ajustado a 2
w. 5ml buffer de fosfato 0.1 M, pH ajustado a 4
x. 5 ml buffer de fosfato 0.1 M, pH ajustado a 6
y. 5 ml buffer de fosfato 0.1 M, pH ajustado a 8
z. 5 ml buffer de fosfato 0.1 M, pH ajustado a 10

Procedimientos
A. Preparación del extracto de hígado
a) Toma un pedazo de hígado y picarlo en trozos de 1 pulgada.
b) En unalicuadora prepara un extracto del hígado para todo el salón con los trozos picados y un poco de agua.
c) Dividir el extracto en vasos de 100 ml bien límpidos. Cada mesa tomara uno de los vasos.
d) Mantener el extracto a temperatura de salón.

B. Actividad enzimática
a) Lavar bien un tubo de ensayo.
b) Colocar 5 gotas del extracto de hígado, 1 ml de agua destilada en el tubo deensayo.
c) Anadir 1 ml de peróxido (sustrato).
d) Medir con una regla milimetrada la cantidad de foam que se ha producido en la reacción.
C. Efecto de la temperatura
a) Lava bien 10 tubos de ensayo. Todos deben ser del mismo ancho y altura. Rotula dos tubos de cada temperatura: 0, 25, 37, 50 y 100.
b) Coloca 100 μL del tejido homogenizado (contiene la enzima) y 1 ml de aguadestilada en cada uno de cuatro tubos. Mantén un tubo a temperatura ambiente 25°C, calienta el segundo tubo a 37°C en el baño y el tercero a 50°C, el cuarto tubo en agua hirviendo 100°C y el quinto en hielo 0°C. Deja cada tubo durante 5 minutos en cada una de las diferentes temperaturas.
c) En los otros 5 tubos y coloca 1 ml de peróxido (sustrato de la enzima) en cada uno. Mantén un tubo atemperatura ambiente (RT), calienta el segundo tubo a 37°C en el baño y el tercero a 50°C, el cuarto tubo en agua hirviendo (100°C) y el quinto en hielo. Deja cada tubo durante 5 minutos en cada una de las diferentes temperaturas.
d) Luego de 5 minutos añade el peróxido a los tubos conteniendo la enzima.
e) Luego de 1 minuto mide la capa de foam en cada tubo. Anota tus respuestas en la...