agentes leudantes en la masa panaria

AISLAMIENTO DE LEVADURAS NATIVAS A PARTIR DE SUEROS LÁCTEOS DE EMPRESAS
PyMES DE LA PROVINCIA DE SANTA FE.
i

ii

i

A. Massera , M. B. Pirola , R. Páez .
i

Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) EEA Rafaela,
ii
Instituto Nacional de Tecnología Industrial (INTI) Lácteos Rafaela.
bpirola@inti.gob.ar

OBJETIVO
Aislar e identificar genotípicamente cepas
nativas deKluyveromyces marxyanus y/o
Kluyveromyces lactis aisladas de ambientes de
quesería (objetivo específico de la línea
“Levaduras”
del
Proyecto
FONARSEC
Agroindustria “Ecosuero con Valor Agregado”
Nº 03/2010).

DESCRIPCIÓN
Las cepas de levaduras de las especies K.
marxianus y K. lactis utilizan la lactosa como
fuente de carbono. Estos microorganismos
pueden estar presentes en ambientes dequeserías. Son levaduras de gran interés
industrial ya que son capaces de utilizar el
suero de quesería y/o sus derivados para
producir biomasa o metabolitos de interés
industrial como enzimas o etanol (González
Siso, 1996).
Para el aislamiento de las levaduras se
tomaron asépticamente muestras de suero de
queso no pasteurizado de seis PyMES
queseras de la provincia de Santa Fe. A estasmuestras se les adicionó cloranfenicol 50
µg/mL para inhibir el desarrollo de bacterias.
Además se las incubó en agitación a 150 rpm
durante 20 h a 28 ° para favorecer la
C
multiplicación de las levaduras. Una alícuota de
este cultivo fue sembrada en placas de Petri
con el medio de cultivo sintético ML (Medio
Lactosa), con lactosa como única fuente de
carbono (Lukondeh y col., 2003).Las levaduras
capaces de crecer en dicho medio se
identificaron
empleando
los
métodos
moleculares propuestos por Belloch y
colaboradores (1998). Como primer paso, a las
colonias aisladas de levaduras se las cultivó en
el medio YDP (5 g/L extracto de levadura, 5 g/L
peptona de carne, 40 g/L glucosa). A partir de
este cultivo se extrajo el ADN utilizando un kit
de extracción comercial(Promega). Para la
identificación por métodos moleculares se
amplificó un fragmento de la región ITS
(internal transcripted spacer) del ADN
ribosomal, el cual fue digerido con enzimas de
restricción (CfoI, HaeIII, HinfI) para obtener

patrones de digestión característicos de cada
especie de levadura aislada (Tabla 1).
Fragmentos generados, en pares de bases (bp), luego
de digestión conenzimas de restricción.
CfoI
HaeIII
HinfI
285+185+140+100

655+80

240+185+120+80+65+50

Tabla 1. Tamaño de los fragmentos de restricción
obtenidos a partir de la digestión con diferentes enzimas de
restricción (CfoI, HaeIII, HinfI) de la región ITS de
Kluyveromyces marxianus (Esteve-Zarzoso y col, 1999).

Posteriormente, se utilizó la técnica de
amplificación de las secuenciasinter-LTR
(Sohier y col., 2009), para diferenciar cepas de
K. marxianus. Todas estas metodologías fueron
previamente puestas a punto utilizando
levaduras de referencia provistas por la ARS
Culture Collection.
Las cepas de levaduras identificadas fueron
conservadas a -20 ºC para futuros estudios de
sus características tecnológicas. Dichos
estudios implican la determinación de la
velocidad deconsumo de lactosa y optimizar
las condiciones de cultivo para lograr una
mayor producción de biomasa microbiana en
medios a base de lactosa.
RESULTADOS
Se han aislado en total 126 levaduras capaces
de degradar la lactosa. Del total de las
levaduras aisladas, 66 fueron identificadas
como K. marxianus mediante la amplificación
de un fragmento de la región ITS de 740 bp
(pares de bases) delongitud (figura 1), con la
que se obtuvo el patrón de fragmentos de
restricción característico al utilizar las enzimas
CfoI, HaeIII y HinfI (figura 2). No se aislaron
cepas de K. lactis a partir de muestras de
suero de queso de la región. Es posible que en
los ambientes de las queserías muestreadas no
se encuentre esta cepa o que la misma se halle
en tan baja cantidad que sea dificultoso...