Analisis cuantitativo de coliformes - microbiologia aplicada

Microbiología Aplicada
2012
Análisis Cuantitativo de Coliformes – Prueba Confirmativa.
Practica de Laboratorio N 2
MICROBIOLOGIA APLICADA
UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

Las bacterias Coliformes son aquellas bacterias de morfología bacilar, Gram (-), aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativas, no esporógenas, que fermentan la lactosa con producción de ácido y gas a 37ºC en un tiempo máximo de 48 horas.
Este grupo comprende los géneros Escherechia, Citrobacter, Kebsiella y Enterobacter, pertenecientes a la familia Enterobacteriaceas.
El método consiste en la determinación del número de Coliformes mediante siembra de distintos volúmenes del agua a analizar en series de tubos conteniendo medio de cultivo líquido lactosado y resiembra en medios de cultivoselectivos con incubación a temperaturas adecuadas. Se basa en la capacidad de estos organismos para producir gas a partir de la lactosa.
Se desarrollará solo la prueba presuntiva que consiste en un procedimiento de criba en el que una reacción negativa excluye la presencia del grupo coliforme y una reacción positiva indica su posible presencia.

Existen diversos métodos para cuantificar el númerode microorganismos presentes en muestras líquidas y sólidas. Dentro de las técnicas más comunes se encuentra el recuento directo por microscopia de fluorescencia, así como losprocedimientos basados en diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintéticos sólidos o líquidos, como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) o la estimación por elmétodo del Número Más Probable (NMP).El método del número más probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este método fue empleado para estimar el número de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que también puede ser aplicado para la determinación de microorganismos aerobios y anaerobios en losdos, sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este método es aplicable para estimar el número de microorganismos en muestras de suelo yagua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias. Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces están formados por  Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella
Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casiexclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia decontaminación fecal. Éstos últimos se denominan termotolerantes por sucapacidad de soportar temperaturas más elevadas. Esta es la característica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotérmicos esfavorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgánica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminación fecal. Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades. Enalimentos, la identificación de una concentración elevada de Coliformes Fecales en un alimento es indicador de su contaminación y por tanto su mala manipulación, de ser esto así, se debe declarar al alimento en cuestión como
No Apto para el Consumo Humano.

1. Comprender y realizar adecuadamente la determinación de Coliformes totales en un alimento, mediante la cuenta en tubos de ensayo con tubosDurham para identificar su estado positivo o negativo.
2. Interpretar los resultados obtenidos, de acuerdo con las normas aplicables.





* Se coloca xml de agua triptonada en un vaso de precipitado.
* Se tara xgr de caldo lactosa y se combina con el agua triptonada del vaso de precipitado.
* Se esteriliza el área donde se va a trabajar con alcohol.
* Se prende el...