Aplicaciones Del Protocolo De Pcr

APLICACIONES DEL PROTOCOLO DE PCR
Applications of the PCR Process

Diana M. ARANGO, Yesmin CAMACHO, Juan C. CARMONA, Daniela LONDOÑO, David HERRERA, Laura V. GONZALEZ G.

RESUMEN
Se analizó una secuencia de DNA de la bacteria Mycobacterium Tuberculosis que es la responsable de la mayor cantidad de casos de tuberculosis en el mundo. La secuencia analizada codifica para la proteína H37Rv,correspondiente a una Beta-lactamasa que es la que le confiere resistencia a los antibióticos penicilinicos; razón por la cual la secuencia es ampliamente estudiada en el ámbito de la medicina. Se utilizó la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), la cual permite la replicación de fragmentos de DNA en muy poco tiempo y permite ampliar los conocimientos sobre la estructura y función delos genes de una secuencia determinada. Para esto se elaboraron dos primers, uno forward y uno reverse, teniendo en cuenta criterios como: Tm entre 55 y 63 grados centígrados, un buen contenido de citosinas y guaninas en los extremos, número de nucleótidos entre 19 y 25 y que no fueran complementarios entre sí. El protocolo de PCR se realizo para 40 ciclos, lo cual permitió ampliar la cadenacorrespondiente lo suficiente para obtener 1,10×1012 copias; finalmente se tomó un ciclo del experimento y suponiendo el uso de Taq Polymerase (con una tasa de reacción de 35 nucleótidos/s) se hallaron las temperaturas y los tiempos óptimos de trabajo.
Palabras clave: PCR, DNA, primer, proteína, tuberculosis.

ABSTRACT
It was analyzed the DNA sequence of the Mycobacterium Tuberculosis bacteria thatis responsible for the greatest number of tuberculosis cases worldwide. The analyzed sequence encodes for the protein H37Rv, corresponding to a Beta-lactamase which is the one that confers the bacteria resistance to penicillins, which is why this sequence is widely studied in the medicine field. The Polymerase chain reaction (PCR) technique was used, which allows a fast replication of DNAfragments and facilitate the knowledge about the structure and function of a gene in a particular sequence. Two primers were elaborated in order to develop the PCR, one forward and one reverse, taking into account criteria such as: Tm between 55 and 63 Celsius degrees, a cap and a tail with a good content of cytosine and guanine, the number of nucleotides between 19 and 25 and not to be complementarybetween each other. The PCR process was performed for 40 cycles, which permitted to expand enough the corresponding strand to get 1,10×1012 copies, finally, the optimal temperatures and times were found for a cycle of the experiment assuming the use of Taq Polymerase (with a Reaction rate of 35 nucleotides/s).
Key words: PCR, DNA, primer, protein, tuberculosis.

INTRODUCCION
Las bases de datosson de gran importancia en los estudios biotecnológicos y en el ámbito de la medicina. Estas nos permiten obtener una gran variedad de información acerca de secuencias moleculares, genes, proteínas, códigos genéticos, organismos y microorganismos, etc. Además, allí se puede obtener infinidad de información relacionada con la salud, las enfermedades causadas por diferentes tipos de microorganismos yvirus, las proteínas o genes asociados a estos, etc. Esta información se encuentra de manera general o detallada gracias a sus filtros de búsqueda y permite profundizar en el conocimiento sobre un tema de interés.

Algunos ejemplos de bases de datos ampliamente usadas en biología molecular y medicina son:
* NBCI (National center for biotechnology information). Hace parte de la biblioteca demedicina de los Estados Unidos, ubicado en Bethesda, Maryland. Fue creado con la misión de ser una importante fuente de información Biología Molecular.
* Medline. Es una de las más reconocidas base de datos de bibliografía médica que existen, también pertenece a la biblioteca de medicina de los Estados Unidos; está enfocada en las áreas de biomedicina y salud.
METODOLOGIA
Se realizo el...