Aplicaciones de la PCR

Aplicaciones de la PCR
Los productos de PCR pueden utilizarse para la secuenciación, detención de patógenos infecciosos (virus bacterias, hongos), amplificación de segmentos para su análisis mediante el ADN finger-pringting, o huella de ADN, en medicina forense, detección de mutaciones, análisis de la expresión génica o determinación de carga viral, entre otras muchas aplicaciones.Diagnostico como aplicación de la PCR
La PCR se encuentra al alcance económico de la mayoría de los laboratorios y en los últimos 20 años se ha convertido en una técnica indispensable para el diagnóstico médico, Con ella se pueden amplificar segmentos que contienen una mutación conocida (diagnostico) o bien mutaciones desconocidas que se secuenciaran y determinaran después de una PCR. Esto ha sido unagran ayuda para el diagnóstico y la correlación de varias génica con enfermedades. EN cuanto a las enfermedades adquiridas, la detención de genomas de patógenos es la aplicación diagnostica más empleada de la PCR. Debido a su alta sensibilidad, permite la detección aun de pocas copias del genoma, lo que suele suceder en los periodos iniciales de la infección; por lo tanto, la PCR permite undiagnóstico temprano.

Práctica laboratorio
OBJETIVO:
Extraer el ADN de diferentes muestras vegetales.
FUNDAMENTO:
1°.- La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libreel ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de las membranas celulares y los rompen.
2°.- La sal evita la unión de proteínas al ADN.
3°.- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separael ADN de otros componentes celulares, de los cuales son dejados en la solución acuosa.
MATERIAL:
1.- Muestra vegetal: Puede tratarse de cebolla, tomate, plátano, germen de trigo o un puñado de guisantes-
2.- Agua destilada o mineral
3.- Sal de mesa
4.- Detergente lavavajillas
5.- Alcohol de 96° muy frio
6.- Varilla de vidrio
7.- Tubo de ensayo
8.- Batidora y un cuchillo
9.- Vaso deprecipitado de 250 ml
10.- Probeta o pipeta
PROCEDIMIENTO:
En el vaso de precipitado pequeño echa 3 cucharaditas de detergente lavavajillas.
2.- Añade una cucharada de sal.
3.- Añade 25 mililitros de agua destilada.
Es necesario utilizar la pipeta para extraer la cantidad de agua adecuada
4.- Mantener en un baño de hielo esta disolución.
5.- Corta la zona central de vegetal elegido encuadrados.
6.- Tritura los trozos de vegetal (en el vaso de precipitado grande) con un poco de agua en la batidora (la mezcla de células y agua debe ser opaca), accionando 2 veces las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células.
7.- Mezcla en el recipiente grande el triturado celular con la disolución inicial del vaso.
8.- Agita vigorosamente la mezcla durante al menos 5minutos, sin formar espuma.
9.- Haz pasar el líquido obtenido por un colador.
10.- Retira 5 ml. de la mezcla a un tubo de ensayo y añade con la pipeta 5 mililitros de alcohol enfriado a 0° C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del tubo de ensayo, teniendo este inclinado. El alcohol quedara flotando sobre la mezcla.
11.- Deja reposar durante 5 minutos hasta que se formeuna zona turbia entre las 2 capas. (Mientras esperas este tiempo, puedes ir recogiendo y limpiando todos los recipientes empleados anteriormente).
12.- Introduce una varilla justo debajo del alcohol (la zona turbia que queda entre las 2 capas). Remueve la varilla hacia adelante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN.
13.- Pasado un minuto, retira...