bachiller

PRACTICA Nº 8
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE DNA
INTRODUCCIÓN

El DNA no existe como molécula libre en las células, por el contrario se encuentra asociado con proteínas y RNA. Es por esto, que los procesos de extracción y aislamiento de DNA de una célula y de otras moléculas es el primer paso para muchos procedimientos de laboratorio en biotecnología, biología molecular, genética einmunología entre otras ciencias. Estos procesos involucran generalmente, rompimiento de las células, desnaturalización de proteínas y la precipitación del DNA como material fibroso. Una vez obtenido el DNA puede ser sometido a diferentes procedimientos como: estudios de paternidad, trabajos forenses para captura de criminales, la amplificación mediante PCR de secuencias específicas con finescomerciales o terapéuticos, el estudio de expresión de genes entre otros procedimientos (sÍ quieres aprender más acerca de las aplicaciones y manipulación del DNA consulta los enlaces interactivos que aparecen al final de la practica). Los pasos que se darán en esta práctica, son similares a los utilizados en los equipos sofisticados de las industrias biotecnológicas; razón por la cuál el estudiante debecomprender la importancia de cada uno estos. Ve a la galería de imágenes para que observes los niveles de empaquetamiento del DNA.

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Aislar e identificar DNA de muestras de cebolla.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
Comprender la importancia de cada uno de los reactivos empleados para la obtención de DNA.
Diferenciar el DNA de otros componentes celulares mediante unareacción de coloración. 41

MATERIALES Y REACTIVOS

• Solución de Sal/Detergente: agregue a 10 mL de detergente y 10 gramos de NaCl (sin YODO) a 90 mL de agua destilada.
• Ablandador de Carne: Agregue 5 gramos del ablandador a 95 mL de agua destilada.
• Solución al 5% p/v de NaCl.
• Etanol de 95% o isopropanol de 95% helado.
• Cebolla blanca fresca.
• Cuchillo.
• Agua destilada.
•Vaso de precipitado de 100 mL.
• Tubos de ensayo.
• Varillas agitadoras de vidrio.
• Papel filtro.
• Hielo.
• Nevera de icopor
• Tabla para picar.

PROCEDIMIENTO

MÉTODO A:

• Pique la cebolla en trocitos de máximo un centímetro cuadrado de tamaño.
• Agregue alrededor de 2 gramos de cebolla picada en un vaso de precipitado.
• Adicione la solución de sal/ detergente encantidad suficiente para cubrir la muestra (alrededor de 10 mL). Sí es necesario con ayuda de la varilla mantenga los trocitos de cebolla por debajo del nivel de la solución mencionada durante 5 minutos. 42
• Decante el líquido en un tubo de ensayo limpio y adicione 5mL de solución ablandadora. Remueva suavemente para mezclar.
• Introduzca la varilla agitadora de vidrio en el tubo y viertacuidadosamente 10mL de etanol helado por las paredes del mismo. Deje que se forme una capa por encima del extracto de cebolla. Deje reposar por 5 a 10 minutos.
• Mueva ligeramente la varilla agitadora a través de la interfase de los dos líquidos, recolectando la sustancia de aspecto mucoso y colóquela en un tubo de ensayo limpio con 10 mL de NaCl al 5% p/v
• La mezcla de aspecto mucoso correspondeal DNA, compruebe mediante coloración con difenilamina.

MÉTODO B:
• (tomado de Genetic Science Learning Center at the Eccles Institute of Human Genetics University of Utah )
• Coloca en una licuadora 100 mL o ½ taza de arvejas verdes con aproximadamente 1/8 de cucharadita de sal.
• Adiciona 200 mL o una taza de agua fria.
• Licua a alta velocidad durante 15 segundos.
• Filtra ellicuado con ayuda de un colador y recoge en un beaker de 500 mL.
• Mide el volumen del filtrado y añade como 1/6 de esa cantidad de detergente líquido; mézclalo con un agitador de vidrio y deja reposar durante 5 a 10 minutos.
• Vierte la mezcla en tubos de ensayo, llenando solo la tercera parte de estos.
• Añade un pellizquito de enzima a cada tubo de ensayo y agítalo suavemente. ¡Se cuidadoso!...