Bacterias

ELECTROFORESIS
GENERALIDADES Y APLICACIONES CLINICAS
Marcelo Castillo Navarrrete, T.M. MsCs (C) Facultad de Medicina Carrera Tecnología Médica 18 de Noviembre de 2004

Fundamentos deElectroforesis
• Alta sensibilidad, resolución y versatilidad. • Método de separación de
– Ácidos nucleicos – Proteínas – Otras biomoléculas

• Entrega criterio de pureza. • Separa mezclas complejas •Permite determinar
– El peso molecular de una proteína – Punto isoeléctrico. – Número de cadenas polipeptídicas de una proteína

Fundamentos de Electroforesis
• Migración de solutos en un campoeléctrico. • Se mueven las partículas en base a:
– Su carga neta. – Peso molecular – Estructura tridimensional

Fundamentos de Electroforesis
“La velocidad de migración (V) de la partícula esdirectamente al producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de potencial eléctrico (E) e inversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) relativo a la talla y forma de la molécula, o sea, a laresistencia que le ofrece el medio”

V = qE/f

Fundamentos de Electroforesis
• La Movilidad electroforética (Me)
– Es un caso particular de la migración de un ión. – En un campo eléctrico de 1V/cm– Su signo es igual al de la carga de la partícula.

• La velocidad de Migración electroforética
– Carga de la molécula – Voltaje aplicado
• Exceso de voltaje = Incremento del calor. • Bajo voltaje= pobre separación (por difusión)

– Porosidad del gel

Fundamentos de Electroforesis
• Las biomacromoléculas.
– Poseen carga eléctrica. – Grupos catiónicos y aniónicos disociables.

• Lacarga neta de una molécula
– pH del medio – La interacción con otras pequeñas moléculas de iones. – La interacción con otras macromoléculas.

Fundamentos de Electroforesis
• La carga neta de unamolécula (2)
– El pH influye en la migración de una molécula – En el punto isoeléctrico, la proteína no migra.
• Por debajo del pto. Isoelectrico migra hacia el cátodo. • Por encima del pto....