Beta-Carotenos

PRODUCCIÓN DE b-CAROTENO
OBJETIVOS.
General.
* Obtener b-caroteno a partir de microorganismos aislados de verduras.
Particulares.
* Aislamiento primario y secundario de una cepa microbiana capaz de producir b-caroteno.
* Mantenimiento e identificación de una cepa microbiana con la facultad de producir b-caroteno.
* Lograr la producción de b-caroteno enun matraz de prueba.
* Realizar la cinética microbiana de la producción de b-caroteno de los microorganismos aislados.
* Lograr el escalamiento en la producción de b-caroteno a fermentador
INTRODUCCIÓN.
Él b-caroteno es un pigmento anaranjado obscuro en las plantas, que al ingerirlo los animales pueden desdoblarlo a dos moléculas de vitamina A (retinol), se utiliza para enriquecer a losalimentos y es útil para la conservación y crecimiento de las células epiteliales de la piel, ojo, vías digestivas y aparato respiratorio. En adición, este es un buen antioxidante para daño a tejido o acción reductora a células, causado por el oxígeno reactivo y por moléculas fototóxicas. El b-caroteno es obtenido de frutas y verduras, también se puede obtener a partir de los microorganismos, unejemplo de esto es Blakeslea trispora, el único inconveniente de la obtención de b-caroteno es que este se halla en la pared celular.
TRABAJO EXPERIMENTAL. ( ver diagrama 1)
Primera parte:
* Se realizaron diluciones de 10-1, 10-2 y 10-3 para cada una de las muestras (zanahoria, pepino, tuna, queso y contaminación del equipo de celulasas)
* Se sembró 0.1ml de la dilución en caja petripor técnica de extensión con varilla de vidrio, se utilizó medio PDA el cual se le bajo el pH con ácido tartárico a una concentración de 0.1%.
* Después de 1 semana se resembraron varias colonias capaces de difundir color al medio, la resiembra se realizó en cajas petri por la técnica de estría cruzada usando PDA más ácido tartárico al 0.1%.
Segunda parte:
* Para la identificación decarotenos se realizó la siguiente prueba colorimétrica:
1-2mg de muestra + 1ml de cloroformo + 5 gotas de H2SO4 conc.
* Si la coloración en la interfase del cloroformo y del ácido es azul, la prueba es positiva, en la muestra hay carotenos.
* Se sembró por punto 2 de las colonias previamente seleccionadas (ya que se tratan de hongos filamentosos), finalmente de estas resiembras se pasarona tubos inclinados con PDA.
Tercera parte
* Se realizaron varios microcultivos en PDA
* Se preparo medio líquido para la selección secundaria, los componentes de este medio son:
Componente | Concentración(g/l) |
Almidón de maíz | 50 |
Aceite de soja| 30 |
Extracto de levadura | 1 |
KH2PO4* | 0.5 |
MnSO4* | 0.2 |

* las sales se esterilizan por separado
* Se inocularon matraces de 250ml del medio y se colocaron en agitación. Se realizaronobservaciones al microscopio con la finalidad de identificar morfología microscópica de esta se encontraron una colonia de levaduras(rosa) y dos hongos filamentosos (morado y contaminación).
Pero tuvimos que cambiar la formulación del medio ya que era muy obscuro y resultaba difícil de leer en el espectro, el medio usado finalmente fue el siguiente
Componente | Concentración(g/l) |Glucosa | 30 |
Extracto de levadura | 2 |
Almidón | 2 |
KH2PO4* | 0.5 |
MnSO4* | 0.2 |

* Después de inocular este medio comenzamos a tomar muestra cada 48 hrs. ya que al...