Bioquimica dislipidemias

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PRACTICA 1: HIPERLIPIDEMIAS.

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL Y TRIGLICERIDOS EN SUERO Y EN LIPOPROTEINAS.

1. INTERES DE LA PRÁCTICA

Es conocida la relación existente entre elevados niveles de triacilglicéridos y colesterol en sangre y el desarrollo de arteriosclerosis y enfermedades coronarias. La importancia de dicha relación ha hecho prudente la recomendación de que se reduzca la ingestade grasas al 30-35 por 100 de los requerimientos energéticos totales y que se reemplacen los ácidos grasos saturados por los insaturados.

Los lípidos de la dieta están formados en un 90% de triacilglicéridos y el resto son ésteres del colesterol, esteroles vegetales, diversos fosfolípidos y otros.

Los lípidos de la dieta que pueden producir mayores riesgos de enfermedades cardiovascularesson:

Colesterol. Pertenece a un grupo importante de compuestos conocidos como esteroides. Es insoluble en agua. Se encuentra en las membranas celulares (exceptuando las células bacterianas). También es un componente principal de la vaina de la mielina, la membrana lipídica que envuelve a las fibras nerviosas de conducción rápida, acelerando el impulso nervioso.

El colesterol es sintetizado enel hígado a partir de ácidos grasos saturados y también se obtiene en la dieta.

Triacilglicéridos. Son lípidos compuestos (su molécula presenta dos o más grupos diferenciados). Constituyen la forma molecular de reserva energética más eficaz de manera que pueden ser almacenados de esta forma en grandes cantidades de tejido adiposo.

Son altamente insolubles en agua y son hidrolizadosenzimáticamente por acción de las lipasas como vereremos en el apartado siguiente.

2. FUNDAMENTO DE LA TECNICA UTILIZADA

1. Determinación de colesterol por métodos enzimáticos.

Algunos de los primeros métodos para efectuar pruebas de colesterol incluían la obtención de productos coloreados, haciendo reaccionar el colesterol con sustancias fuertemente ácidas. Dado que se descubrió que losésteres de colesterol y el colesterol libre no producen cantidades equivalentes de color esto dio lugar a la adición de un paso de saponificación para transformar los ésteres de colesterol en colesterol libre. Actualmente se utilizan métodos más rápidos y seguros que utilizan enzimas como reactivos para las pruebas de colesterol.

Los métodos enzimáticos para el análisis de colesterol fueronideados en los años 70 y desde entonces han reemplazado los métodos químicos casi completamente.

Los métodos enzimáticos se ven menos sujetos a posibles interferencias por sustancias no esterólicas que los métodos químicos. No obstante, no hay absoluta especificidad para el colesterol, dado que su oxidasa puede reaccionar también con otros estelores, que se sabe que están también presentes enel plasma, y con esteroles vegetales, presentes en concentraciones apreciables en la circulación en pacientes con (-sitosterolemia. El método atribuido a Flegg lleva a cabo el análisis en tres pasos; el grupo 3-OH del colesterol es oxidado y el agua oxigenada, que es uno de los productos de la reacción, se determina enzimáticamente:

1. Hidrólisis de los ésteres de colesterol mediante lacolesterol esterasa (CE).

Colesterol esterificado CE Colesterol libre + ácido graso

2. Oxidación del colesterol mediante la colesterol oxidasa (CO) para producir peróxido de hidrógeno.

Colesterol libre + O2 CO 4-Colestenona + H2O2

3. Oxidación de un cromógeno con el peróxido de hidrógeno en una reacción catalizada por la peroxidasa para producir unproducto coloreado.

H2O2 + fenol +4- aminoantipirina peroxidasa quinoneimina + H2O

Con respecto a las enzimas que actúan en estas reacciones, se puede decir que:

- La colesterol esterasa (CE) se encuentra presente en el jugo pancreatico y en el intestino, transforma los esteres del colesterol en colesterol y acido graso libre, y es precisamente en esta forma libre como es...
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