Bioquimica

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Rev Biomed 1999; 10:17-22.

Determinación de L-canavanina por cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa y por colorimetría.

Artículo Original

Concepción M. Capetillo-Leal, Raúl R. Reyes-Ramírez, Carlos A. Sandoval-Castro.

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Autónoma de Yucatán. Mérida, Yucatán, México.

RESUMEN.Introducción. Para estudiar la toxicidad y el efecto metabólico de la canavanina en animales o plantas se depende de la disponibilidad de métodos sensibles, específicos y rápidos de análisis. Materiales y Métodos. Se desarrolló un método para medir la concentración de L-canavanina por cromatografía líquida en fase reversa utilizando DABS-Cl como agente de derivación y se compararon los resultados conaquellos obtenidos por colorimetría por el método de Rosenthal. Cinco muestras de canavalia fueron utilizadas para validar la técnica. Resultados y discusión. La derivación con DABSCl permitió la determinación de éste aminoácido sin interferencia con otros aminoácidos. No se encontraron diferencias entre la concentraciones de L-canavanina en granos de Canavalia ensiformis cuando se midió por estos 2métodos. El análisis colorimétrico puede ser empleado como una herramienta confiable de primer elección. Debido

al alto costo que involucra el análisis por HPLC deberá ser empleado cuando exista evidencia de interferencia en el método colorimétrico de compuestos y/o metabolitos presentes en la muestra. (Rev Biomed 1999; 10:17-22) Palabras clave: L-canavanina, cromatrografía, espectrofotometríaSUMMARY. Measurement of L-canavanine by reverse phase high performance liquid chromatography and by an spectrofotometric method. Introduction. In order to study toxicity and metabolic effects of canavanine in animals or plants a quick, sensitivy and specific method is required. Material and methods. A reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC), using DABS-Cl as derivatizingagent, was developed and the results compared with those obtained by

Solicitud de sobretiros: Carlos A. Sandoval-Castro, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Autónoma de Yucatán. Apdo. 4-116 Itzimná, Mérida, Yucatán, 97100 México. Recibido el 9/Febrero/98. Aceptado para publicación el 25/Mayo/1998. Este artículo esta disponible en http://www.uady.mx/~biomedic/rb991013.htmlVol. 10/No. 1/Enero-Marzo, 1999

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CM Capetillo-Leal, RR Reyes-Ramírez, CA Sandoval-Castro. colorimetry using the Rosenthal method. Five canavalia samples were used to validate the method. Results and discusion. Canavanine determination by HPLC was free from interference with other aminoacids. No significant diferences were found on canavanine concentration in Canavalia ensiformis grains asdetermined by both methods. It was concluded that colorimetric methods may be a first choice option for a rapid screening process. Due to the high cost involved in the HPLC technique, this method should be left for cases when there is interference with metabolites sample is known to exist using the colorimetric technique. (Rev Biomed 1999; 10:17-22) Key words: L-canavanine, liquid chromatography,colorimetry. móforo por reacción con pentacianoaminoferrato y su posterior detección por espectofotometría (1). Este método ha sido criticado por carecer de una especificidad absoluta y un umbral elevado de sensibilidad (4). Como alternativa a los métodos colorimétricos, se ha recurrido a técnicas mas precisas y costosas, como la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) buscando aumentar laconfiabilidad en la determinación de la canavanina . Los métodos por HPLC para la determinación de aminoácidos y compuestos aminados se han vuelto de uso rutinario en los laboratorios de nutrición animal y con esto algunos métodos para la determinación de canavanina han sido desarrollados, utilizando derivatización pre-columna con reactivos como Cloruro de Dansilo (4) y OPA (o-ftaldialdehído)...