Cinética enzimática

3.-Antecedentes generales
Se realizaron 3 laboratorios, en donde se trataron tres temas fundamentales de Biocatálisis: Curvas de Calibrado de Biomasa y Azúcares Reductores, Medios de cultivo y por último, Cinética de Crecimiento.
-Curvas de Calibrado de Biomasa y Azúcares Reductores.
La curva de calibrado es un método de química analítica empleado para medir la concentración de una sustanciaen una muestra por comparación con una serie de elementos de concentración conocida. Se basa en la existencia de una relación en principio lineal entre un carácter medible y la variable a determinar (la concentración).
Al definir biomasa podemos decir que son células o materia orgánica, proveniente de organismos vivos, mientras que los azúcares reductores son aquellos azúcares que poseensu grupo carbonilo (grupo funcional) intacto, y que a través del mismo pueden reaccionar con otras moléculas y pueden provocar la alteración de las proteínas.
La medida de la masa de los constituyentes de la célula bacteriana es utilizada frecuentemente como base para la medida de una actividad metabólica, o de un constituyente metabólico o químico. Los métodos de dispersión de la luz son las técnicasmás utilizadas para monitorear el crecimiento de los cultivos bacterianos. Para este laboratorio se utilizó la técnica de Turbidimetría que mide la reducción de la transmisión de luz debido a partículas de una suspensión y cuantifica la luz residual transmitida.
En cuanto a la Curvas de Calibración de Azúcares Reductores, se utilizó la técnica de cuantificación de estos por DNS. Según la ley deLambert y Beer, la absorbancia es directamente proporcional a la concentración del material que absorbe la luz. Siempre que se utiliza un método espectrofotométrico para cuantificar la concentración de analito presente en una muestra problema, es necesario relacionar la concentración de dicho analito con la cantidad de luz que absorbe del haz que le incide. Se debe preparar una solución estándar,con una concentración conocida de analito y hacer diversas diluciones de la misma, para poder obtener dicha relación y expresarla matemáticamente con la ayuda de la ecuación de la recta. La técnica de DNS cuantifica, como máximo, una concentración de azúcar de un mg/ml, por lo tanto la solución estándar deberá tener esa concentración. A partir de esta solución se deberán realizar las dilucionescorrespondientes para construir una curva patrón, con la que se determinara la concentración del analito en la muestra problema.
-En segundo lugar tenemos la Preparación de Medios de cultivo.
Las bacterias en la naturaleza, según sus necesidades nutricionales, ocupan distintos nichos ecológicos que satisfacen las mismas. En el laboratorio, para conseguir que una determinada especiebacteriana se desarrolle adecuadamente es necesario proporcionarle un ambiente artificial que las satisfaga igualmente. Esto se consigue mediante el uso de los llamados “medios de cultivo”.
Un medio de cultivo es cualquier sustancia líquida o sólida que puede utilizarse en el laboratorio para que crezcan los microorganismos. Cualquiera que sea el medio debe incluir todo lo necesario para elcrecimiento, lo cual varía según el organismo que se quiere cultivar, pero que comprende: agua, compuestos nitrogenados, una fuente de energía y otros factores de crecimiento. Los requerimientos nutricionales de las bacterias varían desde los sencillos compuestos inorgánicos de las autótrofas hasta las complicadas vitaminas y factores de crecimiento de algunas heterótrofas. Para laformulación de los medios de cultivo se debe conocer la concentración celular que se desea, la composición elemental de la biomasa y las fuentes de cada elemento que se utilizarán como nutrientes, además de los requerimientos de factores de crecimiento, los cálculo se realizarán determinando Yx/s para cada nutriente.
Para el laboratorio, utilizamos extracto de levadura, por lo que podemos definir el...