Cinetica Enzimatica

CINÉTICA ENZIMÁTICA

Departamento de Biología, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Universidad del Valle, Cali – Colombia - 2011

RESUMEN
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo de la reacción catalítica y de la especificad del enzima. Durante la práctica se determinó laactivad de la enzima fosfatasa alcalina extraída del intestino del cerdo bajo condiciones de pH, temperatura, concentración de la enzima y del sustrato; observando los cambios en la velocidad generados por estos factores. Además de esto se realizaron cálculos para poder determinar la velocidad máxima (Vmax) y el Km, dando respectivamente 5000 µM/min y 474750 µM basándose en el modelo deMichaelis-Menden y utilizando únicamente la representación Lineweaver – Burke, pues no fue posible determinar dichos valores con la representación de Eadie-Hoffstee
Palabras clave: Actividad enzimática, Km, pH, fosfatasa alcalina, temperatura, concentración.

INTRODUCCIÓN
Los organismos vivos pueden obtener y gastar la energía rápidamente debido a la presencia de catalizadores biológicos llamadosenzimas (Plummer, 1981). Un catalizador biológico es una sustancia que aumenta la rapidez o velocidad de una reacción química, sin verse alterada ella misma en el proceso. (Mathews, 2008). Las enzimas también participan en muchos mecanismos de regulación que de este modo permiten que el metabolismo se adapte a deferentes situaciones. Casi todas las enzimas son proteínas pero también hay ácidosnucleicos catalíticamente activos conocidos como ribozimas. (Koolman, 2004.)
Al mencionarse la cinética enzimática se refiere principalmente a definiciones precisas de las velocidades de reacción y la acción de los catalizadores. Las enzimas modifican la velocidad de una reacción química sin afectar el equilibrio y solo se requieren pequeñas cantidades para efectuar la transformación de un granmoléculas de sustrato, a si mismo, las enzimas funcionan solamente bajo ciertas condiciones de pH, temperatura, concentración de sustrato, entre otras. (Mathews, 2008). La cinética enzimática es la parte de la Enzimología que se ocupa del estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas y las causas de su variación.
En la práctica se trabajó con la enzima fosfatasa alcalina que pertenecea la clase de fosfatasas denominadas fosfomonoesterasas u ortofosfórico-monoester-fosfohidrolasas, la cual es una enzima ampliamente distribuida que hidroliza (Fisbach, 1997) el enlace ester fosfórico entre un grupo y un fosfato y un grupo radical orgánico a pH básico (pH optimo entre 9 y 10) liberando fosfato inorgánico. Una característica de esta enzima es su baja especificidad de sustrato,está presente en gran parte de las células y tejidos corporales, pero con mayor predominancia en los osteoblastos, en las células de los conductos biliares, en los hepatocitos, en las células de la mucosa intestinal y en la placenta. (Boyer, 197).
La cuantificación de la Fosfatasa Alcalina es de particular importancia en distintos exámenes clínicos pues su aumento sumado a otras proteínas comoGAMMA GT es indicador de trastornos hepáticos tales como obstrucción de las vías biliares. La Fosfatasa Alcalina se encuentra normalmente aumentada durante el crecimiento de los huesos de niños y adolescentes, su aumento en etapas posteriores es indicador de trastornos óseos. Se ha propuesto como método no invasivo el estudio de “Isoenzimas de la Fosfatasa Alcalina en el suero de pacientes coninsuficiencia renal”, en cuyo caso la distribución de las mismas se ve alterada, asociando esto a complicaciones óseas e intestinales asociadas al fallo renal. (Hestrin S, 1955).
Un ensayo enzimático se basa en la actuación de la enzima sobre una sustancia, llamada sustrato, catalizando su conversión en otra específica, conocida como producto. Normalmente algún elemento de los que intervienen en...