Coloracion Celular

OBJETIVOS

* Aprender a colorean las placas dependiendo del tipo de muestra.

* Saber diferenciar entre lo que es una coloración simple y una de contraste y a su vez las características que presenta una coloración de azul de metileno (simple) y la coloración de Gram (contraste).

MARCO TEORICO

COLORACION DE AZUL DE METILENO (Tinción positiva).

Permite teñir el interiorcelular. Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.

Procedimiento
1. Extensión: poner una gota de agua en el portaobjetos y extender en ella la muestra
(Escherichia y Bacillus) utilizando el asa de siembra.
2.Fijación: pasar el portaobjetos varias veces por encima de la llama del mechero de alcohol, sin permitir que llegue a hervir, hasta que se seque.
3. Añadir Azul de metileno y esperar 5 minutos.
4. Lavar con agua
5. Secar.
6. Observar primero con el objetivo 40×; luego se añade aceite de inmersión y se observa con el objetivo 100×.

COLORACIÓN DE GRAM 
La tinción de Gram o coloraciónGram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Grampositiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y Bacteria Gram negativas a las que se visualizan de color rosa.
PREPARACION 
La preparación del frotis es algo distinta según que el material a estudiar provenga de un medio sólido o líquido. 

a. Si es a partir de un medio sólido: 

- depositar con el asa una gota de agua en el centro de la lámina, 

- tocar con el asa estériluna porción de la colonia a estudiar, 

- suspender el material recogido en la gota de agua, 

- extender homogéneamente la suspensión con la misma asa mediante varios giros para que el frotis quede delgado. 

b. A partir de un medio líquido o material patológico. 
En estos casos no se necesita diluir el material a estudiar en agua, sino que se toma con el asa estéril una gota del caldo decultivo y se coloca directamente sobre la lámina. 

SECADO: Puede dejarse secar a temperatura ambiente (desecación espontánea) o para apresurar este paso conviene pasar la lámina varias veces y en forma rápida sobre el mechero, en la zona de aire caliente (alto). 

FIJACION: Con este paso se pretende obtener la muerte de los gérmenes, su adhesión a la lámina y la conservación desu morfología. 

COLORACION

En esta técnica se utilizan, como dijimos, varios colorantes en pasos sucesivos a los que se les debe respetar su orden y tiempo de aplicación para lograr resultados fiables. Cada una de estas sustancias se coloca sobre la lámina ubicada en un soporte en la bandeja y se deja actuar el tiempo indicado para cada una de ellas, luego de lo cual se vuelca la sustancia y se arrastrael remanente con agua para continuar con la sustancia siguiente.

ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO
COLORACION AZUL DE METILENO | COLORACION DE GRAM |
* Se hizo un frotis en las amígdalas para tomar la muestra a trabajar. * Se dejo secar y luego se fijo la muestra a la lámina pasándolo varias veces por el mechero. * Se coloco la lámina en el puente de coloración y se cubrió conel colorante azul de metileno por un periodo de 5 min. * Se lavo la lámina con agua. * Se coloco en el microscopio primero en 4x , 10x, 40x y por ultimo 100x con el cual se deben observar las muestras coloreadas. | * Se hizo un frotis en las amígdalas para tomar la muestra a trabajar. * Se dejo secar y se fijo pasándolo varias veces por el mechero. * Se coloco en el puente de...