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6. Análisis microbiológicos

El suelo es un ecosistema que contiene una gran variedad de poblaciones microbianas cuyos miembros representan muchos tipos fisiológicos. Las características químicas, físicas y biológicas de un suelo particular, así como la presencia de crecimiento de plantas influirán en el
número y actividades de sus diversos componentes microbianos. Además, a causa de lanaturaleza heterogénea del suelo varios tipos fisiológicos de organismos serán encontrados en las proximidades cercanas de
uno a otro. La comunidad microbiana en suelos es importante por su
relación con la fertilidad del suelo y con los ciclos biogeoquímicos de los
elementos, además del uso potencial de los miembros específicos para
aplicaciones ambientales e industriales. Por lo que existe lanecesidad de
conocer, enumerar y aislar los miembros principales y menores de la
comunidad microbiana en suelos.
La cuenta viable de microorganismos del suelo puede realizarse por la
técnica de cuenta en placa o la técnica del número más probable (NMP).
Los principios fundamentales de estas técnicas son (1) dispersión de
una muestra en un diluyente apropiado (solución fisiológica), (2)distribución de una alícuota a un medio apropiado de crecimiento, (3) incubación bajo condiciones óptimas, y (4) conteo de las colonias desarrolladas
o lectura de tubos NMP (Germida, 1993).
La composición del medio de crecimiento usado para contar poblaciones
microbianas es importante, ya que afectará el resultado final. El medio de
crecimiento puede ser selectivo o no selectivo. Los medios selectivoscontienen componentes que permiten o favorecen el crecimiento de un grupo determinado de organismos. Los medios no selectivos pueden ser
suficientes para el crecimiento de muchos grupos de organismos como
sea posible. Para contar un tipo fisiológico específico de microorganismos
generalmente es necesario diseñar un medio de cultivo, el cual, cuando es
incubado bajo condiciones apropiadas deatmósfera y temperatura, reduce las interferencias de poblaciones no deseadas.

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Manual de técnicas de análisis de suelos

Aunque la cuenta en placa y la técnica del número más probable (NMP)
son métodos simples de desarrollar, su utilidad está limitada por un número de factores clave, como la elección del medio, problemas con la dispersión, y aún adsorción de microorganismos a la pared dela pipeta, ya
que pueden interferir con la estandarización de estos procedimientos. La
consistencia y adecuado uso de muestras réplica ayudan a minimizar
algunos de estos problemas.
Esta sección provee principios básicos y referencias sobre los procedimientos de conteo y medios de cultivo para algunos tipos representativos de microorganismos del suelo.

6.1. Microorganismos aerobios
6.1.1.Cuenta de microorganismos viables por dilución en placa
Introducción
Existen diferentes técnicas para determinar el número de microorganismos en suelos o aguas, tanto directas como indirectas, Para la determinación de microorganismos heterótrofos totales e hidrocarbonoclastas aerobios, se seleccionó la cuenta microbiana por dilución en placa. Es
una técnica indirecta de cuantificación; sinembargo, provee una medición de la viabilidad microbiana, permite determinar indirectamente el
potencial de biodegradación en un suelo contaminado, es la más adecuada para medios con hidrocarburos como substrato, es rápida de
efectuar y no requiere de mucho material (Lorch et al., 1995; Bossert y
Kosson, 1997).
Método
El conteo de poblaciones microbianas por dilución en placa es un
método simpley rápido para la cuenta viable de células microbianas
en el suelo. Sin embargo, la cuenta obtenida es generalmente 10 a 100
veces menos que aquella determinada por cuenta directa por microscopia. Las razones para esta discrepancia incluyen la exclusión de la
cuenta no viable directamente en el suelo y la inhabilidad para proveer
apropiados nutrimentos en el medio de crecimiento, para...
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