CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA POR PESO MOLECULAR.

CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA POR PESO MOLECULAR.
Este tipo de cromatografía recibe diversos nombres, entre los que destacan cromatografía por filtración en gel, cromatografía de exclusión por tamaños,entre otros. Es una modalidad de la cromatografía líquido – sólido en la que la fase estacionaria es un material poroso inerte, generalmente denominado gel, que permite la discriminación entre lossolutos según su tamaño y su estructura molecular.

1. FUNDAMENTO:

2. FINALIDAD:

3. EQUIPO/MATERIAL:

4. PROTOCOLO:

Se prepara una columna de partículas muy finas de una sustancia inerte,que contenga poros pequeños. Las perlas deben ser porosas fabricadas a partir de poliacrilamida, dextrán (polisacárido bacteriano) o agarosa (derivado de algas).
La muestra en disolución conmoléculas de distintas dimensiones se hace pasar a través de la columna. La muestra puede ser por ejemplo una proteína.
Las moléculas con un mayor tamaño que el de los poros se moverán sólo en el espacio quequeda entre las partículas y, por lo tanto, no sufrirán retraso en su recorrido a través del material de la columna.

5. VENTAJAS/DESVENTAJAS:
La cromatografía en gel es insuperable para laseparación de moléculas que se diferencian en su peso molecular, por las siguientes razones:
Debido a que el comportamiento cromatográfico de casi todas las sustancias en los geles es independiente de latemperatura, pH, fuerza ionica y composición de los tampones, se pueden realizar separaciones prácticamente bajo cualquier condición.
Muchas sustancias lábiles (por ejemplo, las enzimas y lasvitaminas) no resulotan afectadas por la cromatografía en gel, puesto que no hay prácticamente adsorción.
Existe menos dispersión de las bandas que con otras técnicas de cromatografía.
El volumen deelución se relaciona de forma sencilla con el peso molecular de la muestra.
Por otro lado, una consideración “deventajosa” de este método de separación es que los procedimientos son caros y eficaces...