Cromatografía en columna química orgánica

Objetivos
• Conocer la técnica de cromatografía en columna, sus características y los factores que en ella intervienen
• Utilizar la cromatografía en columna para la separación de mezclas de compuestos orgánicos
• Controlar por cromatografía en capa fina la separación de una mezcla de compuestos por cromatografía en columna
Antecedentes
La cromatografía de columna es una técnica utilizadaampliamente para separar mezclas de sustancias neutras con propiedades físicas y químicas parecidas En esta cromatografía se utiliza una fase estacionaria sólida como alúmina o gel de sílice, empacada en un tubo vertical. La mezcla problema se agrega por encima y uno o más componentes quedan adheridos a la fase sólida Estas fracciones absorbidas se pueden lavar de la columna y recogerse con elsolvente indicado La alúmina que ha sido activada por el calor para eliminar los gases adsorbidos, es una sustancia polar fuerte y la facilidad con que se eliminan las fracciones de la columna depende de la polaridad de sus moléculas La selección cuidadosa del disolvente (eluyente) utilizado para el lavado permitirá que las fracciones sean selectivamente eliminadas de la columna; inicialmente seutiliza un solvente no polar y poco a poco se reemplaza por el solvente polar.
En la cromatografía de columna la moléculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad de las moléculas por la fase estacionaria o por la fase móvil Si una molécula A tiene más afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajará mas rápido que A Existen muchos tipos de cromatografía de columna:
• Filtración engel: en ésta las moléculas son separadas por su tamaño El gel consiste en una cama de esferas con poros de un tamaño dado El gel se conoce como sefadex, el cual viene con poros de distintos tamaños Las moléculas de igual o menor tamaño que el poro entran a las esferas mientras que las moléculas más grandes pasan rápidamente por la columna Las moléculas salen en orden de tamaño por el eluydo
•Intercambio iónico: Se usa para purificar proteínas Separa moléculas en base a su carga iónica La fase estacionaria presenta una matriz con carga Al eluir la muestra, las moléculas de igual carga salen con el amortiguador Las moléculas de igual carga sale con el amortiguador Las moléculas de carga opuesta se adhieren al material de empaque con cloruro de sodio o de potasio Esto puede hacerse usandosoluciones con incrementos moderados de salinidad, o de un solo paso, echando la solución de mayor concentración de sal primero al subir la concentración poco a poco podemos recolectar las muestras desde la menos afines por la columna hasta las más afines Durante la elución la sal va compitiendo con la proteína por las cargas de la matriz de la columna hasta que se desprende
• Fase inversa: esta esuna cromatografía de interacción en la que la fase estacionaria, con moléculas hidrofóbicas, interactúa con las moléculas hidrofóbicas en la muestra La matriz consiste de fibras de silicato con cadenas de hidrocarburos Estas atraerán a las moléculas hidrfóbicas de la muestra mientras que las hidrofólivcas salen con el agua y el amortiguador Las moléculas son eluídas de la columna lavando consoluciones de distinta concentración de lacohol o de cualquier otro solvente no polar
Parte experimental:

Materiales:
• Columna para cromatografía
• Matraz redondo de fondo plano
• T de destilación
• Refrigerante (agua) y mangueras
• Tapón esmerilado
• Vasos de precipitados
• Vidrio de reloj Espátula
• Pipeta
• Probeta
• Frasco para cromatografía d cf
• Tibos capilares
• Frascosviales
• Embudo
• Pinzas
• Recipiente para baño maría
• Algodón

Reactivos:

• Ácido benzoico
• Azul de metileno
• Sílica gel para columna
• Acetato de etilo
• Hexano
• Sulfato de sodio anhidro
• Yodo
• Agua destilada
• Acetona
• Muestra testigo de ác. benzoico

Procedimiento:

1. Introducir un poco de algodón en la columna de cromatografía con ayuda de una varilla de vidrio o...