Cultivo De Microorganismos
Páginas: 10 (2267 palabras)
Publicado: 21 de septiembre de 2011
PRACTICA N° 4
TÉCNICAS DE RECUENTO DE MICROORGANISMOS RECUENTO EN PLACA
RESUMEN.
La cuantificación directa e indirecta de microorganismos, es muy utilizada para realizar la determinación de las poblaciones de microorganismos que pueden estar presentes en un cultivo. Las diferentes técnicas de determinación como lo son las directas requieren preparaciones puras que no tengan ningún tipode partículas que puedan alterar el conteo de las poblaciones que hay en una muestra. Estos métodos son: Determinación del peso húmedo, Determinación de peso seco, Determinación de nitrógeno total, Determinación de componentes característicos de las células, Recuento en cámara de Petroff-Hauser, Contadores electrónicos de partículas Coulter.
Los métodos indirectos son más complejos ya que lalectura depende de factores como el tamaño de la bacteria y la formación de agrupaciones, se puede distinguir bien las células que son viables y no viables estos métodos son: Recuento en placa estándar o recuento de microorganismos viables, Escalas o patrones de McFarland, Métodos ópticos de turbidimetría, Consumo de nutrientes o producción de metabolitos / tiempo. El análisis microbiológico, debeser representativa de la población y constituida normalmente por 200 gramos o mililitros, depende del análisis que se baya hacer.
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Palabras claves: Recuento en cámara, precipitación, dilución.
INTRODUCCIÓN.
Es un método muy utilizado cuando se necesita determinar el tamaño de la población bacteriana de una muestra.
El recuento demicroorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollará una colonia visible. Pero debido a que una muestra no es totalmente homogénea con respecto a su composición microbiológica, es posible que una colonia se origine de un microorganismo o de cientos de ellos, dando en este último caso un recuento menor del real, (Ingraham, John L. 1982).También es posible que muchas de las bacterias presentesen la muestra no puedan crecer en las condiciones elegidas (pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo, etc.). En este caso el recuento también será inferior al real. Lo que sí se sabe es que cada colonia observada se formó a partir de por lo menos un microorganismo. Esta es una condición necesaria y suficiente. Entonces la colonia es considera una unidad formadora de colonia (ufc) a los efectosde los cálculos. Se admite, por lo tanto, que en los métodos de recuento de microorganismos vivos, son inevitables los errores. Especialmente cuando se examinan muestras pequeñas, es posible cometer grandes errores. (López Tevez, Leonor y Torres, Carola. Año 2006).
El objetivo de la práctica fue capacitar al estudiante en las metodologías más utilizadas en microbiología, para la cuantificacióndirecta e indirecta de microorganismos y desarrollar habilidades en los estudiantes para el recuento de las poblaciones de microorganismos presentes en muestras de diferente origen.
MATERIALES.
Stomacher o licuadora, Recipiente de vidrio esterilizable (o bolsas de polietileno para Stomacher), Balanza de precisión de 0.1g,
Para preparación de muestras: cuchilla y tijeras, Pipetas 1mL,Pipetas de 10 mL, Frascos con el diluyente (agua peptona 0.1% estéril), Cajas Petri, Cajas Petri con agar para conteo en placa estándar (SPC),
Agar SPC (Standard Plate Count), fundido y mantenido a 45-50°C, Baño de agua (45°C - 50°C), Incubadora de 37°C, Contador de colonias, Agar OGY o Sabouraud (para conteo de hongos y levaduras), Cultivo bacteriano de 24h en caldo, Cultivo fúngico de 3d en agar.MÉTODOS.
Recuento en placa profunda y placa en superficie.
1. Se procedió a realizar los cálculos de diluciones decimales iguales a 10-1, 10-2 y 10-3. Se procedió a diluir la muestra y el diluyente apropiado, guiándose de los cálculos anteriores. Todos los materiales a utilizar deben de estar esterilizados.
Con las tres diluciones preparadas, se procedió a inocular diferentes cajas...
TÉCNICAS DE RECUENTO DE MICROORGANISMOS RECUENTO EN PLACA
RESUMEN.
La cuantificación directa e indirecta de microorganismos, es muy utilizada para realizar la determinación de las poblaciones de microorganismos que pueden estar presentes en un cultivo. Las diferentes técnicas de determinación como lo son las directas requieren preparaciones puras que no tengan ningún tipode partículas que puedan alterar el conteo de las poblaciones que hay en una muestra. Estos métodos son: Determinación del peso húmedo, Determinación de peso seco, Determinación de nitrógeno total, Determinación de componentes característicos de las células, Recuento en cámara de Petroff-Hauser, Contadores electrónicos de partículas Coulter.
Los métodos indirectos son más complejos ya que lalectura depende de factores como el tamaño de la bacteria y la formación de agrupaciones, se puede distinguir bien las células que son viables y no viables estos métodos son: Recuento en placa estándar o recuento de microorganismos viables, Escalas o patrones de McFarland, Métodos ópticos de turbidimetría, Consumo de nutrientes o producción de metabolitos / tiempo. El análisis microbiológico, debeser representativa de la población y constituida normalmente por 200 gramos o mililitros, depende del análisis que se baya hacer.
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Palabras claves: Recuento en cámara, precipitación, dilución.
INTRODUCCIÓN.
Es un método muy utilizado cuando se necesita determinar el tamaño de la población bacteriana de una muestra.
El recuento demicroorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollará una colonia visible. Pero debido a que una muestra no es totalmente homogénea con respecto a su composición microbiológica, es posible que una colonia se origine de un microorganismo o de cientos de ellos, dando en este último caso un recuento menor del real, (Ingraham, John L. 1982).También es posible que muchas de las bacterias presentesen la muestra no puedan crecer en las condiciones elegidas (pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo, etc.). En este caso el recuento también será inferior al real. Lo que sí se sabe es que cada colonia observada se formó a partir de por lo menos un microorganismo. Esta es una condición necesaria y suficiente. Entonces la colonia es considera una unidad formadora de colonia (ufc) a los efectosde los cálculos. Se admite, por lo tanto, que en los métodos de recuento de microorganismos vivos, son inevitables los errores. Especialmente cuando se examinan muestras pequeñas, es posible cometer grandes errores. (López Tevez, Leonor y Torres, Carola. Año 2006).
El objetivo de la práctica fue capacitar al estudiante en las metodologías más utilizadas en microbiología, para la cuantificacióndirecta e indirecta de microorganismos y desarrollar habilidades en los estudiantes para el recuento de las poblaciones de microorganismos presentes en muestras de diferente origen.
MATERIALES.
Stomacher o licuadora, Recipiente de vidrio esterilizable (o bolsas de polietileno para Stomacher), Balanza de precisión de 0.1g,
Para preparación de muestras: cuchilla y tijeras, Pipetas 1mL,Pipetas de 10 mL, Frascos con el diluyente (agua peptona 0.1% estéril), Cajas Petri, Cajas Petri con agar para conteo en placa estándar (SPC),
Agar SPC (Standard Plate Count), fundido y mantenido a 45-50°C, Baño de agua (45°C - 50°C), Incubadora de 37°C, Contador de colonias, Agar OGY o Sabouraud (para conteo de hongos y levaduras), Cultivo bacteriano de 24h en caldo, Cultivo fúngico de 3d en agar.MÉTODOS.
Recuento en placa profunda y placa en superficie.
1. Se procedió a realizar los cálculos de diluciones decimales iguales a 10-1, 10-2 y 10-3. Se procedió a diluir la muestra y el diluyente apropiado, guiándose de los cálculos anteriores. Todos los materiales a utilizar deben de estar esterilizados.
Con las tres diluciones preparadas, se procedió a inocular diferentes cajas...
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