De todo un poco

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L eonor Carrillo. LOS HONGOS DE LOS ALIMENTOS Y FOR R A J E S

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3.TÉCNICAS
HOMOGENEIZACIÓN DEL MATERIAL

El material blando es agitado enérgicamente durante 2 minutos en un matraz con perlas de vidrio, o tratado en una licuadora durante 30 segundos o en un homogeneizador peristáltico durante 1 minuto, usando como diluyente una solución de peptona al 0,1% p/v (King 1992) adicionado de0,05% de tween 80 p/v (Jarvis & Williams 1987). El material duro se muele en un molinillo de granos. También se puede emplear en algunos casos solución fisiológica, solución reguladora de fosfatos o agua destilada con o sin humectante (Hocking & Pitt 1992). Para evitar el choque osmótico en los productos secos o jugos concentrados, se diluye con una solución de sacarosa o glucosa al 20% p/v y si setrata de productos salados se emplea un diluyente con 5% p/v de NaCl. Si la muestra tiene gran cantidad de azúcares y es muy ácida, se diluye (1 + 1) con solución de peptona al 0,1% p/v y se ajusta el pH a 3,5 - 4,0 (Jarvis & Williams 1987).
RECUENTO

Se hace una dilución seriada con el mismo diluyente, agitando continuamente el líquido y transfiriendo con rapidez las alícuotas para evitar lasedimentación de los esporos o células. Se deposita 0,1 mL de cada dilución en la superficie de una placa de medio vaciada en una caja de Petri de 9 cm de diámetro, y se extiende por la superficie con una fina varilla de vidrio doblada en ángulo. Se incuba dentro de una bolsa plástica acompañada de un vaso con agua para evitar la desecación, durante 3 a 7 días a 25°C en las regiones subtropicales,a 30°C en las tropicales y a 22°C en las templadas (Jarvis & Williams 1987). Se consideran las placas que tengan entre 10 y 100 colonias de mohos o levaduras (King 1992).
AISLAMIENTO

La técnica de dilución es también útil para el aislamiento de los hongos en los productos agrícolas, pero a veces conviene sembrar el inóculo tomado directamente de la superficie de material en estudio. En otroscasos se depositan sobre el medio los granos o trozos de muestra, previamente desinfectados por inmersión sucesiva en etanol 70% v/v y en una solución al 10% v/v de agua lavandina concentrada durante 2 minutos, y enjuagados una vez con agua estéril (Akerstrand 1992).
CULTIVOS PUROS

Un cultivo puro de levaduras se obtiene dispersando el material tomado de la colonia a estudiar, mediante estríassucesivas sobre la placa de medio. En cambio, un cultivo puro de mohos se obtiene por repique de un pequeño manojo de hifas o grumo de esporos en varios puntos de la placa de medio selectivo. En algunos casos esta técnica no es satisfactoria y entonces conviene hacer una dispersión de los esporos sobre la superficie de agar estéril. Si son suficientemente grandes se ven con una lupa estereoscópicay con una aguja se toma el trozo de agar que contiene al esporo y se lo transfiere al medio de cultivo (Pitt & Hocking 1997).
MEDIOS PARA RECUENTO Y AISLAMIENTO

Con el fin de evitar el desarrollo exuberante de los mucorales se usa alguno de los medios de cultivo siguientes (Jarvis & Williams 1987).

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L eonor Carrillo. LOS HONGOS DE LOS ALIMENTOS Y FOR R A J E S

El medio Rosa deBengala-Dicloran es selectivo para el aislamiento y recuento de levaduras y mohos significativos en el deterioro de alimentos (Frisvad et al. 1992), pero también el medio Rosa de Bengala es conveniente para aislar los hongos porque reduce la extensión de las colonias sin afectar la germinación de las esporas (Jarvis & Williams 1987). Rosa de Bengala agua peptona sulfato de magnesio heptahidratocloranfenicol pH 1L 5g 0,5 g 0,1 g 7,2 fosfato dipotásico glucosa rosa de Bengala (5% p/v agua) agar 1g 10 g 0,5 mL 15 g

Rosa de Bengala- Diclorán agua 1L fosfato monopotásico 1g peptona 5g glucosa 10 g sulfato de magnesio heptahidrato 0,5 g rosa de Bengala (5% p/v agua) 0,5 mL cloranfenicol 0,1 g diclorán (0,2% p/v etanol) 1 mL agar 15 g pH 5,8 Se esterilizan a 120°C durante 15 minutos y se...
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