Degradaci n de las prote nas miofibrilares en el musculo

Degradación de las proteínas
miofibrilares en el musculo
esquelético de carpín por una
serina proteinasa

Introducción

El carpín es una especie de pez de agua
dulce cultivada en diferentes provincias de
china estos peces constituyen una materia
prima potencial para la producción de surimi
. Sin embargo como ocurre con los peces
marinos, el fenómeno modori también se
produce en el proceso defabricación usando
carne de pescado de agua dulce como la
materia prima.

Objetivos

Objetivo general
En el presente estudio, hemos identificado una
proteinasa con características similares a
Serina Proteinasas Miofibrilares (MBSP) en el
músculo esquelético carpín y estudiamos su
participación en la degradación de las
miofibrillas
y
proteínas
miofibrilares
individuales, como la miosina de cadenapesada, a-actinina, actina y tropomiosina.

Materiales
y Métodos

Pescado

Carpín es una especie cultivada (peso corporal
aproximadamente 350 g ) se obtuvieron con
vida de un mercado en Jimei , Xiamen , China.
Los peces fueron sometidos en agua helada y
se sacrificaron al instante. Después de la
decapitación y evisceración , los peces tenían
molduras y se utilizaron inmediatamente los
filetes parala preparación de las miofibrillas o
guardado en un congelador a 80°C para su
posterior uso.

Productos químicos

Lima inhibidor de tripsina de frijol ( LBTI ) era de
Worthington empresa bioquímica ( NJ , EE.UU. ) ,
fenilmetanosulfonilo fluoruro ( PMSF ) y benzamidina
son productos de Sigma- Aldrich , L - 3 - carboxi -trans2 , 3 - epoxypropionyl -L- leucina - 4 guanidinobutylamide (E- 64 ) fue unproducto de
Amresco ( Solon , Ohio , EE.UU. ) , pepstatina se
adquirió de Roche ( Mannhem , Alemania), EDTA y
proteínas estándares para SDS-PAGE eran de Bio -Rad
( Richmond , CA , EE.UU. ) y agentes immunoblotting
fueron de New England Biolabs ( Beverly, MA , EE.UU. )

Preparación de las miofibrillas de
músculo esquelético
El músculo del carpín (20 g de peso húmedo), se almaceno a
80 ° C, setroceó y se homogeneizó con cuatro volúmenes de
tampón fosfato 50 mM enfriado con hielo (pH 7,5), usando
un homogeneizador. El proceso de homogeneización se
realizó sobre hielo usando un Polytron, PT-DA 2120 en el
indicador de velocidad de 15, y la operación se llevó a cabo
dos veces (30 s cada vez y un intervalo de 1 min).
Finalmente, después de centrifugación a 3000 g durante 15
min, el sedimentose resuspendió en 50 mM de tampón de
fosfato (pH 8,0) que contenía NaCl 0,5 M y esta suspensión
se consideró como la carpa de Crucian miofibrillas.

La proteína concentración se determinó por el
método de Lowry, Rosebrough, Farr, y Randall
(1951) después de 10 veces dilución de la
miofibrilla pescado con tampón fosfato 50 mM
(PH 8,0) que contiene NaCl 0,5 M.

Análisis por SDS-PAGE y Western
BlotEs la electroforesis de proteínas más
ampliamente usada. Su nombre significa la
electroforesis en geles de poliacrilamida que
se realiza en presencia de SDS ('SDSpolyacrilamide gel electrophoresis'). Fue
descrito por Laemmli (Laemmli (1970),
Nature, 277, p. 680). Se trata de un tipo de
electroforesis desnaturalizante en la que las
muestras se desnaturalizan por calor en
presencia de agentesdesnaturalizantes
(beta-mercaptoetanol, que destruye los
puentes disulfuro, SDS que desnaturaliza y
recubre a la proteína con cargas netas

Degradación de las proteínas miofibrilares
en diferentes temperaturas
Se investiga la acción de degradación de la
proteinasa endógena en las proteínas miofribilares
a diferentes temperaturas de la carpa crucian
(utilizando aproximadamente 200 μl). Aquí se
observola degradación de MHC por la proteinasa
endógena se observo por SDS-PAGE, mientras que
la de otras proteínas (actinina, actina y
tropomiosina) se detectó por Western Blot.

Degradación del curso de tiempo
de proteínas miofibrilares

Para investigar la degradación de las
proteínas miofibrilares por la proteinasa
endógena, se hizo un estudio de tiempo en
curso, utilizando 200µl de miofibrilla...