Demostracion de la actividad enzimatica

PRACTICA Nº04
4.1. DEMOSTRACION DE LA NATURALEZA PROTEICA DE LAS ENZIMAS
INTRODUCCIÓN:
Las enzimas son proteínas especializadas en la catálisis de las reacciones biológicas, se encuentran entre las más notables de las biomoleculas conocidas debido a su extraordinaria especificidad y a su poder catalítico, que es mucho mayor que la de los catalizadores hechos por el hombre. Gran parte de lahistoria de la bioquímica es la historia de la investigación de las enzimas. El nombre enzima (en la levadura) no se empleo hasta 1877, pero mucho antes ya se sospechaba que ciertos catalizadores biológicos intervenían en la fermentación de azúcar para formar alcohol. La primera teoría general sobre la catálisis química, publicada por j. j. Berzelius en 1835, incluía un ejemplo de lo que ahora seconoce como enzima, la diastasa de la malta, y señalaba que la hidrólisis del almidón se cataliza por la diastasa con mas eficacia que por el acido sulfúrico.
Todas las enzimas conocidas son proteínas. Son compuestos de alto peso molecular, constituida principalmente por cadenas de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos
Las proteínas realizan múltiples funciones en los seres vivos:contracción, transporte, regulación, sostén, defensa, etc. En todos los casos existe en el fundamento de su actividad un mecanismo de reconocimiento molecular, o sea, una interacción especifica entre la proteína y una o mas sustancias.
Las proteínas especializadas en la función catalítica reciben el nombre de enzimas y las sustancias sobre las cuales se denominan sustrato. Lo que distingue a las enzimasde las demás proteínas es precisamente que, una ves producido el reconocimiento molecular del sustrato, se realiza la transformación de la sustancia reconocida, o sea, como consecuencia de diferentes interacciones entre la proteína enzimática y su sustrato, este experimenta un reordenamiento de sus elementos constituyentes debido a la ruptura y formación de algunos enlaces químicos. La sustanciaque resulta de la acción de la enzima sobre el sustrato recibe el nombre de producto. Como consecuencia, una de las principales adquisiciones evolutivas de los seres vivos fue la aparición de proteínas con actividad catalítica, que al disminuir la energía de activación de las reacciones hacen posible no solo que estas se produzcan a gran velocidad, sino que se lleven a cabo en condiciones moderadasa temperatura, pH, etc. Compatibles con la vida.
REACTIVOS:

Buffer fosfato 0,1M PH 6.6 HCl 3N

NaCl 0.15M Solución yodada

NaOH 1N, NaOH 1N, HCl 0.05N y Acido tricloroacetico 20%Amilasa salival


PROCEDIMIENTO:COMPONENTES / TUBOS | I | II | III | IV | V | VI |
Enzima al 10% | 1 ml | 1 ml | 1 ml | 1 ml | 1 ml | 1 ml |
NaOH 1N | ----- | 2,4 | ----- | ---- | ----- | ----- |
HCl 3N | ------ | ------- | 2,4 | ------ | ------ | ----- |
acido tricloroacetico | ------- | ------- | ------ | 2,4 | ------ | ------ |
CuSO4 20% (sal fuerte) | ------- | ------- | ------ | ------- | 2,4 | ------ |
Bufferfosfato 0,1M PH=6,6 | ------- | -------- | ------- | ------- | ------- | 2,4 |

Dejar los tubos I al V en reposo durante 10 minutos a la temperatura del ambiente y el tubo VI colocarlo en un baño de agua hirviendo, por el mismo tiempo.

Tubo VI

* Durante este lapso constituir el siguiente sistema:
COMPONENTES / TUBOS | I | II | III | IV | V | VI |
Almidón | 1 ml | 1 ml | 1 ml | 1 ml |...