DENGUE


UNIVERSIDAD DEL ZULIA
FACULTAD EXPERIMENTAL DE CIENCIAS
DIVISIÓN DE ESTUDIOS PARA GRADUADOS
MAESTRÍA EN BIOLOGÍA: MENCIÓN INMUNOLOGÍA BÁSICA
PROFESORA: MsC. Mayerly NAVA



UNIDAD I: MÉTODOS ANALÍTICOS EN BIOQUÍMICA
APLICACIÓN EN ARTÍCULO: Expresión Y Purificación De La Proteína Completa NS1 Del VirusDengue Serotipo 2 A Partir De Un Aislamiento







Mariana C. TORRES PORTILLO
MEDICA CIRUJANA-PEDIATRA PUERICULTORA
V.-15.841.469

MARACAIBO, VIERNES 14 FEBRERO DE 2014

INTRODUCCIÓN
La infección por virus dengue (DENV) constituye la arbovirosis más importante a nivel mundial. Afecta anualmente a más de 50 millones de personas con un aproximado de 25.000 muertes según datos de laOrganización Mundial de la Salud. La ausencia de vacunas y agentes antivirales específicos contra DENV deja más de 2 billones de personas en riesgo de infección, con especial énfasis en países con altos índices de pobreza que se mantienen en constante estado de alarma.
Muchas infecciones pueden resultar asintomáticas, y los casos sintomáticos tienen gran variabilidad de expresión clínica, siendola más común los casos de fiebre dengue con signo-sintomatología similar a influenza, sin embargo una minoría de casos progresa a fiebre hemorrágica por dengue y los más graves a síndrome de shock por dengue caracterizado por colapso circulatorio.
La infección por DENV es causado por uno de los cuatro serotipos: DENV-1, DENV-2, DENV-3 y DENV-4, del género flavivirus. El agente viral es de tipoARN de cadena sencilla con un genoma de aproximadamente 11kb. Está constituido por tres proteínas estructurales identificadas como proteína C, de Membraba (prM) y de envoltura (prE); y siete no estructurales a saber: NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b y NS5. Esta diversidad antigénica confiere importancia por la poca duración de la inmunidad a largo plazo entre los diferentes serotipos virales.La proteína NS1 es una glicoproteína de 45 a 50 kilodaltons expresada tanto asociada a la membrana mNS1 y secretada en forma de sNS1. La proteína NS1 es una glicoproteína atípica ya que no forma parte de la estructura del virión pero se expresa en la superficie de células infectadas, y su función aún no está completamente estudiada pero la evidencia preliminar sugiere que está implicada en lareplicación del ARN viral.
El diangóstico temprano y preciso es importante para el control de casos y la notificación epidemiológica oportuna. NS1 permite el diagnóstico precoz de casos, inclusive antes de la positividad de aparición de anticuerpos IgM.
Los métodos para asilamiento del antígeno NS1 de células de mamíferos infectadas por DENV permiten la obtención de muy poca cantidad de proteínapara su caracterización, mientras que el antígeno obtenido de cultivos permite obtener un sobrenadante de 5 a 10 µgr⁄ml. Por lo tanto el uso de la proteína NS1 recombinante para inmunización en ratones para producción de hibridomas o como antígeno para diagnóstico de infección por virus dengue es un enfoque más apropiado. Muchos trabajos han reportado el éxito de sistemas heterólogos de expresiónde NS1 como el de E. coli, a pesar de que este implica procedimientos de desdoblamiento, y renaturalización de la proteína.



OBJETIVOS
En este trabajo, se clonó y expresó la región completa de NS1 del serotipo 2 en E. coli y el antígeno desnaturalizado fue utilizado directamente como inmunógeno.
Determinar si los anticuerpos obtenidos de ratones inmunizados reconocieron solamente losepítopes lineales de los antígenos secretados naturalmente, pues diferentes estudios realizados han arrojado la dominancia inmune y reactividad cruzada de epitopes lineales presentes en las proteínas NS1 de los cuatro serotipos del DENV.

MATERIALES Y MÉTODOS


1. MUESTRA DE SUERO EN HUMANOS
Se tomó muestras de 11 pacientes infectados con DENV; 5 en estadío de enfermedad aguda y 6 en fase...