determinación de las proteínas

Practica 1.
Determinación de la concentración de proteínas totales.

Introducción
Las proteínas son moléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos y constituyen el 50 porciento de supeso en seco. Prácticamente todos los procesos biológicos dependen de la presencia o actividad de este tipo de moléculas.
En los laboratorio es sumamente importante conocer las técnicas de comopurificar proteínas, sobre todo cuando se quiere aislar una en concreto del resto para conocer sus propiedades y sus funciones. Esto nos servirá para el estudio de esa proteína con el fin de , por ejemplo ,encontrar la solución de una patología relacionada con ella.
Existen varios métodos para determinar la concentración de proteínas de una muestra, tales como la determinación de la absorbancia a 280nm, o mediante la formación de derivados coloreados de las proteínas, base de los métodos de Biuret o Lowry. En estos casos se forma un complejo coloreado de cobre con el enlace peptídico; en el métodode Lowry, además del complejo anterior también se forma un derivado de las tirosinas que contribuyen a la absorbancia total.
En la practica realizada se ha utilizado un colorante hidrofobico cuyasdisoluciones acuosas en presencia de acido fosfórico tienen un color pardo y que al encontrarse en el entorno hidrofobico en el interior de una proteína , origina un color azul intenso que se puedemedir fácilmente. Su principal ventaja es que resulta mas fácil de emplear que otros métodos alternativos y mas sensible q la medida de absorbancia a 280 nm.
OBJETIVOS
Aprendizaje de la concentración deproteínas
Destreza en el uso de micropipetas y del material del laboratorio
Elaboración de rectas de calibrado tras conocer los resultados la concentración de la proteína
Material
Tubos Eppendorfo de cristal, gradilla, micropipetas(20-200, 100-1000) , puntas amarillas y azules.
SDS al 0.01%
Solución de stock de BSA: o.1mg/ml en SDS al 0.01%
Solucion Bradford : compuesta por azul...