Determinación de proteínas







Objetivos:
Elaborar una curva de calibración para la cuantificación de proteínas empleando un método fotométrico.
Determinar si hay diferencia estadísticamente significativa en laprecisión y la exactitud entre los métodos de Bradford y Lowry.
Conocer el efecto de sustancias no proteínicas, en el desarrollo de color.
Analizar las ventajas y desventajas del método de Lowry, conrespecto a otros métodos para la cuantificación de proteínas.
Resultados para Hemoglobina (Hb)
Tabla 1: Curva de calibración por método de Lowry.
No. Tubo
Cantidad de proteína (μg)
A 590 nmSerie "a"
Serie "b"
χ
1
25
0,098
0,098
0,098
2
50
0,201
0,209
0,205
3
75
0,236
0,266
0,251
4
100
0,347
0,328
0,337
5
125
0,413
0,405
0,409



Gráfica 1: Curva tipo para ladeterminación de proteínas por el método de Lowry




Tabla 2: Replicas para el análisis estadístico
No. Tubo
A 590 nm
Cantidad de proteína (μg)



1
0,287
83,552
2
0,296
86,501
30,276
79,948
4
0,266
76,671
5
0,273
78,965
6
0,264
76,016
7
0,305
89,450
8
0,25
71,429
9
0,296
86,501
10
0,276
79,948

Prueba "t" de Student
37,28
Hay diferenciasignificativa

Tabla 4: Efecto de sustancias no proteínicas en el Método de Lowry
No. Tubo
Sustancia
A 590 nm
Cantidad de proteína (μg)
Tipo de Interferencia





1
Tris 1 M, pH 7.0
0,14
35,39Negativa
2
Glicerol al 1% (v/v)
0,227
63,89
Negativa
3
Detergente comercial 1%
0,198
54,39
Negativa
4
SDS al 1.0%
0,224
62,91
Negativa
5
TCA al 5%
0,194
53,08
Negativa
6
Fenol al1%
2,033
655,64
Positiva
7
Mercaptoetanol al 0.1%
0,245
69,79
Negativa
8
Tris 1 M, pH 10.0
0,162
42,60
Negativa
9
Urea al 5%
0,267
77,00
Negativa
10
(NH4)2SO4
0,288
83,88Negativa






Resultados para Albúmina
Tabla 1.2 Curva de calibración por método de Lowry.
No. Tubo
Cantidad de proteína (μg)
A 590 nm


Serie "a"
Serie "b"
χ
1
25
0,073
n/a*
0,073...